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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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唯念念念

新虫 (初入文坛)

[交流] crispr基因编辑鉴定是否敲除

最近在做敲除，设计了四个靶点，转基因苗比较多，但是扩增靶点序列测序，序列没有变化，是真的没敲掉吗？共有两个基因，都是这样的情况，还有基因比较序列是不是只在NGG上游有变化，下游序列的替换是不是不能说敲掉了？急！急！急！谢谢！谢谢！谢谢！

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1楼2018-04-15 01:03:09
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
有没有人知道的，急！急！急！

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2楼2018-04-15 17:47:48
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无金易主

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 17:47:48
有没有人知道的，急！急！急！

那就是没敲掉

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3楼2018-04-15 19:42:49
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无金易主

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 19:42:49
那就是没敲掉
...

我已经敲掉一个基因，但是第二个从开始就敲不掉很奇怪

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4楼2018-04-15 19:43:50
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 19:43:50
我已经敲掉一个基因，但是第二个从开始就敲不掉很奇怪
...

我这两天做的结果我觉得跟靶点关系很大

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5楼2018-04-15 22:01:52
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 19:43:50
我已经敲掉一个基因，但是第二个从开始就敲不掉很奇怪
...

还有就是扩增靶点附近的序列送测序，测序结果峰图特别乱，用DSD解码不出来，有没有遇到这种情况？是怎么解决的？谢谢  最近测序这块各种问题

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6楼2018-04-15 22:04:05
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 19:43:50
我已经敲掉一个基因，但是第二个从开始就敲不掉很奇怪
...

不知道你用的哪套载体，有没有可能cas蛋白突变了？

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7楼2018-04-15 22:05:58
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无金易主

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 22:05:58
不知道你用的哪套载体，有没有可能cas蛋白突变了？
...

我用的Pcas9

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8楼2018-04-15 22:16:35
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无金易主

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8楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 22:16:35
我用的Pcas9
...

和PTargetF

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9楼2018-04-15 22:17:09
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无金易主

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6楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 22:04:05
还有就是扩增靶点附近的序列送测序，测序结果峰图特别乱，用DSD解码不出来，有没有遇到这种情况？是怎么解决的？谢谢  最近测序这块各种问题
...

我都没有测序直接重叠PCRp出来直接电转的

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10楼2018-04-15 22:18:04
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