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Ivy尘

新虫 (正式写手)

[交流] 求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光

在另一个版块发帖没人理啊……
构建了带GFP的双元表达载体(潮霉素抗性),用发根农杆菌转烟草,筛选了抗潮霉素的毛状根,用倒置荧光显微镜观察荧光。直接看根,有明显荧光,但是压片冲水后荧光就非常弱了,而且未转基因的烟草根也有轻微荧光。怀疑看到的绿色的荧光感觉是化合物的荧光。
请问大家用倒置荧光显微镜观察烟草有背景荧光吗?
正确的图应该是什么样的,有必要冰冻切片(10微米)在激光共聚焦下面看吗?
图1-3都是未压片、转基因的毛状根,4是20倍物镜下的视野。压片后的太弱了拍不好,空白的烟草根的纤维或者中柱也有绿色荧光,只是稍微淡一点。

求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-1


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-2


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-3


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SunRuikang

新虫 (小有名气)

帮顶

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2楼2018-03-21 22:21:15
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suitime

新虫 (初入文坛)

如果在上海,我们有便携式GFP激发光源,可以借给你直接观察,不用荧光显微镜,但昨天在一个客户那里,遇到同样,野生烟草和带GFP的烟草小苗根系都有很亮的绿色荧光。
3楼2018-04-25 16:11:35
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sky恋

新虫 (初入文坛)

我觉得是你片子没有做好 之前做拟南芥 片子做好了可以直接看共聚焦 你想看细胞层面 普通荧光显微镜可能不理想 不管是是分辨率 还是光谱  PS 你用的发根农感菌是那个株系?验证过吗

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4楼2018-04-26 10:49:29
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by suitime at 2018-04-25 16:11:35
如果在上海,我们有便携式GFP激发光源,可以借给你直接观察,不用荧光显微镜,但昨天在一个客户那里,遇到同样,野生烟草和带GFP的烟草小苗根系都有很亮的绿色荧光。

感觉绿色的光是烟草根里次生代谢产物的光,不知道怎么消除
5楼2018-04-26 19:21:33
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sky恋 at 2018-04-26 10:49:29
我觉得是你片子没有做好 之前做拟南芥 片子做好了可以直接看共聚焦 你想看细胞层面 普通荧光显微镜可能不理想 不管是是分辨率 还是光谱  PS 你用的发根农感菌是那个株系?验证过吗
...

发根农杆菌是买的商品感受态,MSU440,诱导烟草很成功,质粒是pHB-GFP,带潮霉素抗性,毛状根用潮霉素筛选过了,可以认为抗潮霉素的根即为阳性根吗?
6楼2018-04-26 19:23:53
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屋檐下3

新虫 (初入文坛)

我也遇到了同样的情况?水稻根系对照背景全是绿色。。。
7楼2018-07-10 11:42:20
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dxwlly

金虫 (小有名气)

用体视镜看植物茎段和根系都有很强的自发荧光,有时候共聚焦都不好使,可以用换带GUS的载体来转染,染色确认
8楼2018-10-23 10:24:27
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列文虎克

新虫 (初入文坛)

问题解决了吗  我这里看杨树也有很强的自发荧光
9楼2019-05-16 10:08:10
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