查看: 400  |  回复: 8

Ivy尘

新虫 (正式写手)

[交流] 求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光

在另一个版块发帖没人理啊……
构建了带GFP的双元表达载体(潮霉素抗性),用发根农杆菌转烟草,筛选了抗潮霉素的毛状根,用倒置荧光显微镜观察荧光。直接看根,有明显荧光,但是压片冲水后荧光就非常弱了,而且未转基因的烟草根也有轻微荧光。怀疑看到的绿色的荧光感觉是化合物的荧光。
请问大家用倒置荧光显微镜观察烟草有背景荧光吗?
正确的图应该是什么样的,有必要冰冻切片(10微米)在激光共聚焦下面看吗?
图1-3都是未压片、转基因的毛状根,4是20倍物镜下的视野。压片后的太弱了拍不好,空白的烟草根的纤维或者中柱也有绿色荧光,只是稍微淡一点。

求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-1


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-2


求指教!!!如何观察烟草毛状根gfp荧光-3


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SunRuikang

新虫 (小有名气)

2楼2018-03-21 22:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suitime

新虫 (初入文坛)

如果在上海,我们有便携式GFP激发光源,可以借给你直接观察,不用荧光显微镜,但昨天在一个客户那里,遇到同样,野生烟草和带GFP的烟草小苗根系都有很亮的绿色荧光。
3楼2018-04-25 16:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky恋

新虫 (初入文坛)

我觉得是你片子没有做好 之前做拟南芥 片子做好了可以直接看共聚焦 你想看细胞层面 普通荧光显微镜可能不理想 不管是是分辨率 还是光谱  PS 你用的发根农感菌是那个株系?验证过吗

发自小木虫Android客户端
4楼2018-04-26 10:49:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by suitime at 2018-04-25 16:11:35
如果在上海,我们有便携式GFP激发光源,可以借给你直接观察,不用荧光显微镜,但昨天在一个客户那里,遇到同样,野生烟草和带GFP的烟草小苗根系都有很亮的绿色荧光。

感觉绿色的光是烟草根里次生代谢产物的光,不知道怎么消除
5楼2018-04-26 19:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sky恋 at 2018-04-26 10:49:29
我觉得是你片子没有做好 之前做拟南芥 片子做好了可以直接看共聚焦 你想看细胞层面 普通荧光显微镜可能不理想 不管是是分辨率 还是光谱  PS 你用的发根农感菌是那个株系?验证过吗
...

发根农杆菌是买的商品感受态,MSU440,诱导烟草很成功,质粒是pHB-GFP,带潮霉素抗性,毛状根用潮霉素筛选过了,可以认为抗潮霉素的根即为阳性根吗?
6楼2018-04-26 19:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屋檐下3

新虫 (初入文坛)

我也遇到了同样的情况?水稻根系对照背景全是绿色。。。
7楼2018-07-10 11:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dxwlly

金虫 (小有名气)

用体视镜看植物茎段和根系都有很强的自发荧光,有时候共聚焦都不好使,可以用换带GUS的载体来转染,染色确认
8楼2018-10-23 10:24:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

列文虎克

铁虫 (初入文坛)

问题解决了吗  我这里看杨树也有很强的自发荧光
9楼2019-05-16 10:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Ivy尘 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 2019年个人全部收入(末流本科院校,副教授) +5 yyallen2003 2020-01-18 5/250 2020-01-18 16:21 by sinscream98
[文学芳草园] 男生会在意女生的家庭条件吗 +77 Xym1234 2020-01-13 93/4650 2020-01-18 16:17 by 静静的海河1
[教师之家] 咨询一下西安交大的人事制度 +10 Zzzzzzxxc 2020-01-17 15/750 2020-01-18 14:55 by fabiaodejia
[找工作] 三线城市二本,还是省会城市高职? +12 dodonazou 2020-01-15 15/750 2020-01-18 08:52 by yanyuxin
[考博] 金属材料考博 +9 77497749 2020-01-16 17/850 2020-01-18 00:12 by 学习君cb
[公派出国] 法国巴黎萨克雷大学招收物理化学材料方向CSC博士,导师发表过多篇nature +4 cxye1989 2020-01-15 6/300 2020-01-17 22:41 by --八云--
[论文投稿] 大修后decision in process +8 dengsy9517 2020-01-15 13/650 2020-01-17 21:12 by 纯-钧
[育儿交流] 一个家庭的故事 +11 luowenwu 2020-01-14 20/1000 2020-01-17 17:22 by kingkongking
[考博] 想读管理科学与工程在职博士,北京,给点意见大家 +4 lq20093879 2020-01-16 5/250 2020-01-16 16:38 by lq20093879
[职场人生] 都不容易 +3 Zabrina 2020-01-15 3/150 2020-01-16 07:24 by wry3300
[硕博家园] 郁闷 +32 Relive柠 2020-01-13 40/2000 2020-01-15 15:51 by equality
[论文投稿] 读不懂审稿人意见,求指点 +5 River_2 2020-01-13 7/350 2020-01-15 12:41 by yaoyongl
[药学] 薄层比移值问题! +3 伍12345 2020-01-13 6/300 2020-01-15 11:49 by wangluo335
[基金申请] 今年限项规定,对科研水平普通的老师不利? +3 addressing 2020-01-14 4/200 2020-01-15 10:07 by kuikui9802
[公派出国] 外方补助情况 +7 yigeli 2020-01-14 16/800 2020-01-15 01:52 by 止水的眼睛
[考博] 求拉考博微信群,QQ群 +5 sinscream98 2020-01-14 6/300 2020-01-14 19:10 by zst921
[基金申请] 博新和特别资助(站前)申报过没中也不能再报了? +5 bbhuang 2020-01-13 7/350 2020-01-13 21:28 by kudofaye
[材料综合] 磁控溅射要怎么实现高产量啊 +3 jgvkfddsg 2020-01-13 3/150 2020-01-13 15:31 by 巴蒂315
[基金申请] 连续两年面上未中,今年还能报吗? +10 Abc321 2020-01-12 10/500 2020-01-13 11:45 by wdtech
[考博] 一间复试被刷,一间初审过不了,我太难了…… +13 jifanshi5 2020-01-12 17/850 2020-01-13 10:04 by ,,vvv
信息提示
请填处理意见