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原核双元表达一蛋白的两个亚基，考染两个亚基都有条带而WB只有一条，求助
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用pETDuet1构建了一蛋白的两个亚基的双元表达质粒，大亚基68kD.小亚基41kD.测序把整个表达质粒都测通了，结果除了bom区域少了三个碱基之外，其余都是与预期一致的。转染BL21(DE3)表达后，取裂解液SDS-PAGE电泳，同时跑了两块胶，一块考染，一块用作WB，考染两条条带都出来了，小亚基条带与marker相差几kD左右.WB一抗是抗6His tag的，结果只出来了小亚基条带，并且与考染的位置还不太一样，大亚基条带没出来，但结果还显示有很多有6His tag的蛋白没跑下来。请问具体可能是什么原因？万分感激！ 下图是考染，上图是WB   @gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2018-04-08 19:37:42
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问了默克的技术人员说那几个碱基不影响表达。现在在尝试跟换培养条件后，我Western出现两条条带了，但是大小都对不上，大亚基理论68kD结果在55kD，小亚基理论41kD结果在35kD下方。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2018-04-09 16:07:38
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