【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 4537  |  回复: 7
【悬赏金币】回答本帖问题,作者邓大夫将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

邓大夫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位:SDS-page过表达蛋白位置偏小已有1人参与

请教各位:我的目的蛋白预计大小17kD,但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带,请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗?万分感谢!
另外:1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况,如图,尝试过低温了,效果还不是很好,请问有什么其他办法吗?
          2.同一个样品,跑了两次,很粗的条带位置却发生了变化,变小了,请问有什么原因吗?

求助各位:SDS-page过表达蛋白位置偏小
IMG_2292.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanshenghao

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感觉是不是凝胶本身的问题呢,跑小分子蛋白的话个人觉得最好用4-20%的梯度胶或者Tricine胶呢,这样效果可能会好一点
7楼2018-03-14 10:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

查无此人lyp

新虫 (正式写手)

2楼2018-02-25 21:38:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jkli2121

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 邓大夫 at 2018-02-25 15:25:18
请教各位:我的目的蛋白预计大小17kD,但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带,请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗?万分感谢!
另外:1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况,如图,尝试过低温了,效果还不是很好, ...

?胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度
?? ? ? ? 抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间
3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物
4)目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定
5)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2018-02-26 13:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓大夫

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jkli2121 at 2018-02-26 13:28:51
?胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度
?? ? ? ? 抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间
3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在 ...

感谢!
4楼2018-02-28 09:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 24年 申博 化学/材料 一作6篇sci +3 wangyp123 2024-04-23 4/200 2024-04-23 23:38 by 莹亮的星空
[博后之家] 南京大学-广州大学联合招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 黑魔变身啾 2024-04-20 8/400 2024-04-23 23:25 by 黑魔变身啾
[论文投稿] 期刊推荐 20+3 木颜尘ip 2024-04-22 5/250 2024-04-23 23:03 by topedit
[公派出国] 東京大学 应用化学专业柳田研究室 招收修士/博士生 +5 蝶梦123 2024-04-19 5/250 2024-04-23 22:40 by 90472jvvh
[硕博家园] 聊天 +8 暮色恋伊人 2024-04-22 9/450 2024-04-23 21:50 by 神圣省
[论文投稿] 无under review,直接DIP,咋么办。 +10 lizhengke06 2024-04-19 16/800 2024-04-23 19:15 by 化学程序员
[考研] 0854-0855调剂 +5 shangannum1 2024-04-21 8/400 2024-04-23 17:08 by Dam026
[有机交流] 紧急求助,有谁用过三甲基硅醇钾TMSOK吗? 1000+3 genius2008 2024-04-19 8/400 2024-04-23 16:57 by czyzsu
[考博] 山东大学化学与化工学院刘磊课题组博士研究生招生启事 +7 sdorganic 2024-04-17 9/450 2024-04-23 16:28 by 让一切随风l
[硕博家园] +8 s150535912 2024-04-18 9/450 2024-04-23 15:48 by huixiong0627
[基金申请] 颜宁:基础研究应顶天立地,立地即从需求端作为问题的出发点,立项背景就是面向真实需求 +10 zju2000 2024-04-18 10/500 2024-04-23 11:46 by 稻花香
[电化学] 有偿收购废弃锂硫电池 +3 汤圆喵 2024-04-19 5/250 2024-04-23 10:41 by Happy C
[论文投稿] Chemical Engineering Journal投稿3周了,一直显示With editor状态。这是送审了吗? 10+3 yifeng11 2024-04-20 7/350 2024-04-23 09:29 by bobvan
[教师之家] 河海大学常州校区新进的讲师待遇如何?考核要求如何? +3 德国小球迷 2024-04-19 18/900 2024-04-22 19:23 by ZHONGWU_U
[论文投稿] 国家重点研发计划论文可以发MDPI里的期刊吗 +6 lin_2018 2024-04-17 6/300 2024-04-22 17:32 by 20094958
[基金申请] 国社科项目,你们学校都限额申报吗? +5 屡战屡败 2024-04-21 7/350 2024-04-22 13:03 by 屡战屡败
[考研] 298求调剂 +10 孙大大@ 2024-04-17 11/550 2024-04-20 18:33 by 371122gyd
[基金申请] 估计今年青基又没戏 +11 忆念7 2024-04-18 11/550 2024-04-20 17:29 by mygod_nju
[论文投稿] CCS Chemistry投稿求助 30+3 wfqtriumph 2024-04-17 4/200 2024-04-19 08:56 by Bletilla
[论文投稿] SCI 评审意见回复 模板 15+3 Kilig0317 2024-04-18 4/200 2024-04-19 08:46 by bobvan
信息提示
请填处理意见