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求助各位：SDS-page过表达蛋白位置偏小已有1人参与
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请教各位：我的目的蛋白预计大小17kD，但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带，请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗？万分感谢！ 另外：1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况，如图，尝试过低温了，效果还不是很好，请问有什么其他办法吗？ 2.同一个样品，跑了两次，很粗的条带位置却发生了变化，变小了，请问有什么原因吗？  IMG_2292.JPG |
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送红花一朵4楼2018-02-28 09:25:25
查无此人lyp
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1041.3
- 散金: 30
- 红花: 2
- 帖子: 314
- 在线: 43.7小时
- 虫号: 2582636
- 注册: 2013-08-05
- 性别: MM
- 专业: 兽医免疫学
2楼2018-02-25 21:38:25
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?胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度 ?? ? ? ? 抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间 3）酶失活，建议直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物 4）目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体，建议查询相关文献确定 5）标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建议设置阳性对照比对结果，增加标本上样量 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2018-02-26 13:28:51
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蛋白分子量偏小本身就不是很好跑，浓度不是主要因素，条带已经完全出现显而也不是孵育问题，也可能是抗体问题，很多蛋白指标在不同组织中分子量是不同的。你可以看看不同厂家的说明分子量这块。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-03-01 09:03:59
10