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邓大夫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位:SDS-page过表达蛋白位置偏小已有1人参与

请教各位:我的目的蛋白预计大小17kD,但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带,请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗?万分感谢!
另外:1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况,如图,尝试过低温了,效果还不是很好,请问有什么其他办法吗?
          2.同一个样品,跑了两次,很粗的条带位置却发生了变化,变小了,请问有什么原因吗?

求助各位:SDS-page过表达蛋白位置偏小
IMG_2292.JPG
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查无此人lyp

新虫 (小有名气)

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2楼2018-02-25 21:38:25
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jkli2121

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 邓大夫 at 2018-02-25 15:25:18
请教各位:我的目的蛋白预计大小17kD,但是考染后在11kD处出现一条很粗的条带,请问有哪些原因能导致目的蛋白变小的吗?万分感谢!
另外:1.每次跑胶整个泳道会有发虚的情况,如图,尝试过低温了,效果还不是很好, ...

?胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度
?? ? ? ? 抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间
3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物
4)目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定
5)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2018-02-26 13:28:51
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邓大夫

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jkli2121 at 2018-02-26 13:28:51
?胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度
?? ? ? ? 抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间
3)酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在 ...

感谢!
4楼2018-02-28 09:25:25
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liulinjie

捐助贵宾 (初入文坛)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 邓大夫 at 2018-02-28 09:25:25
感谢!...

蛋白分子量偏小本身就不是很好跑,浓度不是主要因素,条带已经完全出现显而也不是孵育问题,也可能是抗体问题,很多蛋白指标在不同组织中分子量是不同的。你可以看看不同厂家的说明分子量这块。

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5楼2018-03-01 09:03:59
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邓大夫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liulinjie at 2018-03-01 09:03:59
蛋白分子量偏小本身就不是很好跑,浓度不是主要因素,条带已经完全出现显而也不是孵育问题,也可能是抗体问题,很多蛋白指标在不同组织中分子量是不同的。你可以看看不同厂家的说明分子量这块。
...

谢谢!
6楼2018-03-01 10:20:28
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wanshenghao

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感觉是不是凝胶本身的问题呢,跑小分子蛋白的话个人觉得最好用4-20%的梯度胶或者Tricine胶呢,这样效果可能会好一点
7楼2018-03-14 10:07:15
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