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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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lqjsunny

新虫 (小有名气)

[求助] smart-seq2技术细节咨询已有1人参与

各位大神,
        有做过Smart-Seq2技术分离单细胞的吗？你们在 Ampure XP beads纯化后，一般一个细胞能够得到多少ng的DNA?
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lqjsunny

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1楼2018-02-10 15:44:24
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
？？？单细胞才几皮克啊。。。你是做到最后吗？最后整个流程结束10ng左右
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2楼2018-02-11 14:51:29
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lqjsunny

新虫 (小有名气)
送红花一朵
我们不知道是不是磁珠回收的时候没有洗干净，导致单细胞扩增的阴性对照（即没有细胞的PCR产物）回收之后测浓度也有数值，和样品回收的总产量差不多。猜测除了污染以外还有没有其他原因？大神有没有遇到过。这样回收下来，单个细胞经过20轮的PCR 扩增之后总产量能达到200ng.多的有点不敢让人相信啊。求大神指点！多谢!
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3楼2018-02-16 23:09:50
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lqjsunny at 2018-02-16 23:09:50
我们不知道是不是磁珠回收的时候没有洗干净，导致单细胞扩增的阴性对照（即没有细胞的PCR产物）回收之后测浓度也有数值，和样品回收的总产量差不多。猜测除了污染以外还有没有其他原因？大神有没有遇到过。这样回收 ...

你没有回复我，是我自己回顾自己的答案发现你回复。。我的天
我也试过，阴性出污染了，那就真的是污染了，没办法，只能灭菌一整套，2000mg/L有效氯擦拭，紫外照射，酒精喷洒，单独一个房间做这些步骤，最重要是有效氯喷洒，有刺激性的要小心不要进眼睛，喷完后，隔天才能通风。
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4楼2018-02-22 15:12:35
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by bbqlhb at 2018-02-22 15:12:35
你没有回复我，是我自己回顾自己的答案发现你回复。。我的天
我也试过，阴性出污染了，那就真的是污染了，没办法，只能灭菌一整套，2000mg/L有效氯擦拭，紫外照射，酒精喷洒，单独一个房间做这些步骤，最重要是有 ...

做完这些，发现还是污染了。就换水，在挑取细胞的PBS里出问题，更换。大概就这些污染地方了
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5楼2018-02-22 15:14:56
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lqjsunny

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bbqlhb at 2018-02-22 15:14:56
做完这些，发现还是污染了。就换水，在挑取细胞的PBS里出问题，更换。大概就这些污染地方了...

谢谢大神！我会考虑这些的。能否方便告知下您的微信号，我想好好的请教下您其他的细节！
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6楼2018-02-22 17:31:03
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