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冯笙swaning

新虫 (小有名气)

[交流] 请问拟南芥GK系列的突变体怎么鉴定纯合体？已有4人参与

在nasc上买的以GK开头的拟南芥种子，但是不知道知道怎么验证，还有买的是t2种子，不知道怎么验证纯合?求指教啊。
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1楼2018-02-02 17:25:42
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先长出植物
然后设计flanking TDNA的primer，结果应该是阴性，阳性表示杂合或没有
然后用你的两边的primer跟TDNAprimer PCR， 阳性表示表示有TDNA
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-02-03 04:42:52
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-02-04 06:38:19
去文章里找有没有人用过这个突变体，有的话看人家怎么做鉴定的。没有的话找到这个突变体的资料是T-DNA插入还是点突变，如果是T-DNA插入，网站一般都会有T-DNA的上游通用引物，在T-DNA序列两端设计一对包含这段T-DNA上游引物序列的引物，把这三个引物混合在一起做multiple PCR或者分开做PCR，如果是点突变，你需要设计dCAPS引物做酶切认证了，这个比较麻烦。
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。
3楼2018-02-03 15:45:23
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yang666666

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们也准备做GK的，有些问题想请教，方便加下QQ2634040062
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4楼2018-07-29 19:59:41
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yang666666

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-02-03 04:42:52
首先长出植物
然后设计flanking TDNA的primer，结果应该是阴性，阳性表示杂合或没有
然后用你的两边的primer跟TDNAprimer PCR， 阳性表示表示有TDNA

您好！有些问题想请教，方便加下QQ2634040062，谢谢
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5楼2018-07-31 11:03:20
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mxm12345

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
点突变，怎样设计dCAPS引物做酶切认证了？请各位大神赐教
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6楼2019-05-19 14:28:36
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