【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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感觉要延期哎

新虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒pYES2转化酵母H1246,挑取单菌落进行pcr,没有目的条带

制作酿酒酵母H1246感受态,用醋酸锂法转化重组质粒pYES2后,用尿嘧啶缺陷型的SC培养基加2%葡萄糖筛选,30度培养48小时后,长出白色单菌落,挑取单菌落到10微升无菌水中,98度加热10分钟,取2微升进行pcr,跑胶发现点样孔很亮,但没有目的条带,查了查说是蛋白挂孔,p了两次都没有目的条带,会是假阳性吗?因为是第一次做,很多东西都不懂,请各位大神帮帮忙

重组质粒pYES2转化酵母H1246,挑取单菌落进行pcr,没有目的条带


重组质粒pYES2转化酵母H1246,挑取单菌落进行pcr,没有目的条带-1


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Neo2000

木虫 (著名写手)

酵母菌落PCR不容易出结果,可以考虑抽质粒后检测,不过一般情况下,只要培养基过关了,都是阳性的

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2楼2018-01-30 16:34:19
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糖糖666

新虫 (小有名气)

原来是这样的,我以为是菌落污染了所以单个菌落很少,你下次再多稀释一个梯度进行点样,这样分离的单菌落会更好,一般平板点样的菌落控制在200到300间比较方便观察

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6楼2018-01-30 18:02:12
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糖糖666

新虫 (小有名气)

4楼2018-01-30 16:49:24
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感觉要延期哎

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2018-01-30 16:34:19
酵母菌落PCR不容易出结果,可以考虑抽质粒后检测,不过一般情况下,只要培养基过关了,都是阳性的

我是同时转化了三个不同的基因,长得都是一样的,不像是有杂菌污染,太谢谢您了

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3楼2018-01-30 16:46:06
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感觉要延期哎

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 糖糖666 at 2018-01-30 16:49:24
好像有有些污染,我看着像

三个板子长得都是一样的,因为培养的时间有点长,有些单菌落连起来了,可以大概说一下哪里像有污染么,我第一次做啥都不懂

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5楼2018-01-30 17:11:56
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感觉要延期哎

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 糖糖666 at 2018-01-30 18:02:12
原来是这样的,我以为是菌落污染了所以单个菌落很少,你下次再多稀释一个梯度进行点样,这样分离的单菌落会更好,一般平板点样的菌落控制在200到300间比较方便观察
...

哦哦好的,谢谢您

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7楼2018-01-30 19:43:09
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叁贰壹

新虫 (小有名气)

8楼2018-02-03 19:54:34
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panda的熊

新虫 (初入文坛)

想请教一下构建酵母真核表达的质粒直接连蛋白的cds序列行不行啊?还是要加酵母的序列?

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9楼2018-02-04 03:23:35
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感觉要延期哎

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by panda的熊 at 2018-02-04 03:23:35
想请教一下构建酵母真核表达的质粒直接连蛋白的cds序列行不行啊?还是要加酵母的序列?

跟酵母表达载体连接一般是两端保护碱基,两端酶切位点,中间cds

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10楼2018-07-18 09:56:39
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