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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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LIVESOCCER

金虫 (正式写手)

[求助] western杂不出带，胶上有蛋白已有2人参与

最近做western光系统的核心蛋白，提了类囊体膜蛋白，跑SDS胶上有蛋白条带，半干转膜，抗体孵育（phtoAB的抗体），DAB染不出色，杂不出！大家帮忙分析下原因
我想着（1）DAB显色不敏感，换用ECL化学发光法？（2）转后的膜没用PBST漂洗SDS，影响一抗与蛋白结合？（3）一抗二抗结合差，这条可能性不大，抗体都一个牌子的一块买的。（4）吐温干扰一抗二抗结合？


感谢大家！帮忙想想，文章修改日期马上到了，意见一条就是补western试验 哎！

western杂不出带，胶上有蛋白
IMG_20180120_110142.jpg


western杂不出带，胶上有蛋白-1
膜.jpg
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1楼2018-01-21 21:40:37
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kimiyanze

新虫 (初入文坛)
送公司做，1000一块胶

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2楼2018-01-21 21:42:28
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3119986279

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 07:51:31
提取的蛋白浓度低，转膜的电压时间也很重要，需要摸索，可以查查文献看看

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3楼2018-01-21 22:59:48
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-23 11:13:39
可能抗体不行哦，告诉蛋白名称的话可以帮你看看别人sci中的实验条件与常用抗体
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4楼2018-01-22 21:04:05
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说实话你的转膜太差，marker应该要非常清晰才行。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
5楼2018-01-23 03:18:36
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石泉shiquan1

新虫 (小有名气)
转膜还需要调整

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6楼2018-02-01 23:44:16
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