查看: 150  |  回复: 3

晋鹏

版主 (知名作家)

[交流] [优秀文章推荐]中大构建了一种高效的Cas9驱动的基因转录激活方法已有3人参与

[优秀文章推荐]中大构建了一种高效的Cas9驱动的基因转录激活方法


        CRISPR SAM(synergistic activation mediator)采用切割活性缺失的dCas9蛋白融合VP64转录激活蛋白,加上能与RNA结合蛋白MS2的sgRNA2.0,特异性识别并结合目标基因的启动子。MS2蛋白上连接p65和HSF1转录激活蛋白。通过多种转录激活蛋白的协同作用,能更好的模拟细胞内转录激活(图1,CRISPR/Cas9 SAM原理)。研究表明,单一位点SAM的转录激活效果远高于多个位点dCas9-VP64的转录激活效果。

[优秀文章推荐]中大构建了一种高效的Cas9驱动的基因转录激活方法-1


        与传统转基因相比,CRISPRa系统是通过激活细胞内源基因表达来提高目标基因的表达量,它不需要转入外源DNA,降低了由于转基因造成的基因组不可逆转突变的风险。另外,结合gRNA文库,可同时激活多个基因的转录与表达。此前Gain-Of-Function筛选主要是通过cDNA文库实现,但由于部分cDNA克隆难度较大致使cDNA文库覆盖率不完全;同时cDNA文库并不能涵盖每个基因的所有转录本;基因的表达也会受到细胞内部元件的调控。利用dCas9-VP64-gRNA系统进行的高通量筛选可在同一个启动子上设计多个gRNA来提高基因的转录活性,基因转录本也会更为全面。已有研究表明,利用CRISPR/Cas9系统选择性的上调基因表达,可以用来诱导干细胞的分化或重编程、刺激组织再生、补偿遗传缺陷、激活已经失活的抑癌基因、进行基因功能筛选以及合成基因回路。

[优秀文章推荐]中大构建了一种高效的Cas9驱动的基因转录激活方法-2


        例如:当转录激活子VP64与dCas9融合后,能够促进靶向基因的表达。但后续实验证实,若直接将dCas9与VP64融合,只能较小程度地提高转录水平。人们试着将VP64与dCas9的氨基端和羧基端融合或将dCas9与10拷贝数的VP64融合,均能提高CRISPR-dCas9对基因表达的促进作用。

[优秀文章推荐]中大构建了一种高效的Cas9驱动的基因转录激活方法-3


        转录激活子VP64与dCas9融合可以促进靶向基因的表达,但只能较小程度地提高转录水平。目前报道的三种基于dCas9技术的转录激活系统(VPR, SAM和SunTag)在动物细胞中得到很好的应用,但在植物中还没有一种有效的转录激活系统,该研究团队报道了一种植物中的高效的转录激活系统 dCas9–TV,与 dCas9–VP64相比, dCas9–TV在单基因或者多基因的激活方面都表现的比较强的激活效率,另外研究表明,该系统同样适用动物细胞。
回复此楼
及时行乐,人生不留遗憾!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

优秀版主优秀版主

2楼2017-11-22 21:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
3楼2017-12-02 02:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

明清远

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
研究扎实,思路清晰
4楼2020-03-13 10:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 晋鹏 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[分子生物] 求问基因测序服务都用谁家的? +4 hualotang 2021-12-03 6/300 2021-12-06 10:25 by shuaibia6
[考博] 联系的导师突然说没名额了,心态崩了 10+5 刹车时代 2021-11-30 22/1100 2021-12-06 10:21 by BusyGer
[硕博家园] 导师选择问题 +5 呜哩呜哩哇 2021-12-05 13/650 2021-12-06 09:56 by 西红柿大侠
[找工作] 事业编制高校或特聘副研究员? +18 pp8997 2021-12-05 32/1600 2021-12-06 09:04 by waitingforu
[微生物] 菌株能保存在50%的甘油里面吗? +3 dr.lixiang 2021-12-02 3/150 2021-12-06 07:49 by linli1031
[教师之家] 社科青椒科研单干是否可行? +5 火龙果007 2021-12-05 5/250 2021-12-05 23:33 by leecosta
[硕博家园] 连分享生活小事情的伙伴都没有了 +14 123amybaby 2021-12-02 15/750 2021-12-05 21:31 by 木纹尤修
[有机交流] 做实验需要叠氮化钠 +18 皇者武艺 2021-11-29 20/1000 2021-12-05 13:05 by 0911530215
[论文投稿] 遇到不负责任的审稿人了!! +18 澪123 2021-12-03 18/900 2021-12-05 08:01 by zhaiwindy6
[博后之家] “广东省海外博士后人才支持项目”30万变成了到手9万多。。。 +18 东南一号 2021-12-01 19/950 2021-12-05 01:06 by truthofsz
[高分子] 甲基丙烯酸十八烷基酯结晶 10+3 Cuz哑竹 2021-12-02 5/250 2021-12-04 13:18 by 西红柿大侠
[教师之家] 关于高校编制 +7 czzxxx 2021-12-02 9/450 2021-12-04 11:16 by 科大耀享
[硕博家园] 埋身何须桑梓地,人生无处不青山 +4 napolun99999 2021-12-01 9/450 2021-12-03 18:45 by l954546059
[论文投稿] 一审半个月就完成了是不是大概率被拒了? 10+3 sm_Yi 2021-12-01 11/550 2021-12-03 11:47 by sm_Yi
[基金申请] 。。。。。。 +7 mlrmlr 2021-12-02 10/500 2021-12-02 22:41 by itpfeng
[考博] 哈尔滨工业大学深圳校区考博避雷 +5 我要学习FK 2021-12-02 6/300 2021-12-02 12:46 by 西红柿大侠
[硕博家园] 博士找工作 +6 mahui4543 2021-11-30 7/350 2021-12-01 10:31 by wycaipy
[硕博家园] 思考人生 +4 花季少女心 2021-11-30 4/200 2021-12-01 07:54 by 菜鸟也爱球
[硕博家园] test +4 是小乖哦 2021-11-29 7/350 2021-11-30 18:33 by 是小乖哦
[硕博家园] 厦门大学国家杰出青年科学基金项目获得者侯旭教授课题组招收优秀研究生、博士后! +6 houxugroup 2021-11-30 6/300 2021-11-30 13:32 by 小董科研
信息提示
请填处理意见