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charles08

木虫 (著名写手)

[求助] 周质蛋白含量很高,但SDS-PAGE电泳检测却没有目的蛋白????已有2人参与

我的实验是目的基因在周质蛋白的表达,用渗透压休克法得到了周质粗蛋白溶液,测粗蛋白280有较为明显的含量:

         对照组BL21空菌处理的周质蛋白含量0.08左右,各转化子蛋白在4-5mg/ml.----------------按说这个含量应该说明蛋白在周质表达很明显啦,但是问题来

了,电泳跑胶出来看不到目的条带,不知是什么原因,请大家帮忙分析分析!!!
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charles08

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-11-15 11:55:07
我觉得还是以page为准吧,蛋白含量这个很粗糙了,你想啊,微生物培养过程的阶段很难掌控的,不同阶段差一点点蛋白含量组分就差别很大的.....

我现在在做浓缩纯化了,看看有无表达的情况
7楼2017-11-19 07:14:37
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lao-nan-hai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达

发自手机版WAP
让生命站立成树!
2楼2017-11-11 12:20:50
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charles08

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lao-nan-hai at 2017-11-11 12:20:50
有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达

什么意思,sorry!"有目标蛋白,没分离出来;没我目标蛋白,没表达
"
3楼2017-11-12 02:57:34
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snoopytbw

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用蛋白含量标定是否表达,显然是不正确的,细菌生长过程蛋白含量也在飙升,做个阴性对照吧。SDS没跑出来就说明没表达
4楼2017-11-13 09:01:00
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