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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 博来霉素（Zeocin）质粒提取浓度低
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

[求助] 博来霉素（Zeocin）质粒提取浓度低已有2人参与

在提取博莱霉素抗性质粒的时候浓度很低，质粒是pGAPZαA，宿主菌是E.coli DH5α，博来霉素工作浓度25μg/ml，试剂盒用的是天根的，试剂盒本身没什么问题，提其他抗性的质粒浓度能达到300ng/μl，就是提博来霉素抗性质粒的时候浓度低只有100ng/μl，5ml LB培养基培养过夜，菌液浓度是够的。请问有没有谁知道这是什么原因？大家有遇到过这样的问题吗？
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ATGC
1楼2017-10-26 13:49:28
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
这个是质粒拷贝数比较低吧，跟抗性基因关系不大。建议看看质粒的复制原点的性质。而且100ng/uL不算低了。
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2楼2017-10-27 09:46:02
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jzpxs

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
Forest666(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励积极回帖 2019-02-21 09:08:17
需要使用LSLB培养基，就是氯化钠的使用量只有LB的一半。
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3楼2019-02-20 23:47:48
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

100ng的不算低了，低的有二三十的。如果想抽提的高一些，可以更换其他丰富培养基
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4楼2019-02-21 11:34:16
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阳光雨露118

新虫 (小有名气)
你好，你的问题解决了吗？我现在也遇到了同样的问题，能和我说说吗？

发自小木虫Android客户端
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5楼2021-04-25 15:21:40
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abcjlm

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阳光雨露118 at 2021-04-25 15:21:40
你好，你的问题解决了吗？我现在也遇到了同样的问题，能和我说说吗？

你如果做电转酵母的话，不用担心你提的浓度问题，如果你想提高抽提浓度，最好是换宿主
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6楼2021-04-28 08:36:16
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