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RyanKai

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌RNA提取已有3人参与

第一泳道是5000Marker,第二泳道是我提的RNA,提取方法是用trizol,提成这样可以做qPCR吗?OD比例不是很好,OD260/OD280只有1.56

细菌RNA提取


@youlinglyw @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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山里的猫先森

新虫 (小有名气)

有DNA污染??最后用DNA酶处理下试试
2楼2017-10-24 08:43:49
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RyanKai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 山里的猫先森 at 2017-10-24 08:43:49
有DNA污染??最后用DNA酶处理下试试

你好,我想问一下细菌做qPCR是不是也要提RNA,然后反转录后才能做?

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3楼2017-10-24 11:42:32
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jinweistu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-27 07:48:09
你的RNA完整性还可以,260/280比值偏低,应该是你吸取RNA水相的时候吸到了酚氯仿等有机物杂质,有可能会影响扩增。
细菌做qPCR看你要做什么了,RNA模板肯定要反转录啊
4楼2017-10-26 10:16:33
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RyanKai

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jinweistu at 2017-10-26 10:16:33
你的RNA完整性还可以,260/280比值偏低,应该是你吸取RNA水相的时候吸到了酚氯仿等有机物杂质,有可能会影响扩增。
细菌做qPCR看你要做什么了,RNA模板肯定要反转录啊

我现在已经反转录了,要做qpcr了,不会做,我老师只是和我说做一下qpcr,我都不知道做来干嘛的,我的菌里有两个基因,看它们的差别

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5楼2017-10-26 19:37:09
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酷莱博

新虫 (小有名气)

看表达水平?逆转录,设计引物。扩cdna 。后面直接问卖给你qpcr试剂的厂家

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6楼2017-10-28 20:34:13
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实验室小白

新虫 (正式写手)

请问你提的是什么菌呀?有用溶菌酶吗?我也要提,但是什么都提不出来,浓度只有几纳克

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7楼2018-01-25 11:27:25
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摩天轮711

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用试剂盒试试呢,且TRIZOL提的好坏跟个人经验有关。可能效果不好。且苯酚氯仿气味很大。用试剂盒可以减少对个人操作能力的要求,还可以减少手提中各种有毒试剂对身体的毒害。省时省力,提出来的rna的量有保证!如果不缺经费的话就用试剂盒提吧,凯杰QIAGEN,天根TIANGEN,百代BIOG都是常用的。
8楼2018-12-10 16:04:35
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是的,细菌做qPCR也要先提RNA,然后反转录后CDNA才能做.楼主你这个应该是所提取到的RNA里面有杂质,这样做qPCR结果不一定能好,我建议你重提。我们实验室用BIODAI技术提取到的RNA紫外值一般在1.9左右
9楼2019-03-18 08:52:00
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