[交流] PCR扩增无条带，一片拖尾，求大神帮忙分析一下！已有12人参与

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1楼2017-08-23 17:49:15

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drwhoknowss

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6楼: Originally posted by 如梦如幻 at 2017-08-24 09:35:21
70ng
...

太多了。最多只能用1ng。太多模版会有这种情况

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11楼2017-08-30 23:55:29

PattyGao

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引物问题，你可以把你的引物分成两段，先扩出大片段，再连后续的引物

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8楼2017-08-24 17:06:00

jerry110

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:31:37

定点突变扩环引物设计突变点两侧各15bp，GC含量高加1%DMSO，扩环循环18-20即可，个人建议仅供参考，祝好！

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9楼2017-08-28 10:51:41

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有没考虑过引物有问题呢……你这完全没带形没产物呀……

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2楼2017-08-23 19:02:15

drwhoknowss

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用了多少ng 质粒做模版？

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3楼2017-08-23 23:22:38

周大神

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这个确实不好说，还是像楼上说的从引物出发

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面对阳光，努力生长

4楼2017-08-24 03:05:28

zyfskj

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什么都没p出来，，，，我建议你再设计一对引物出来，或者你做温度剃度，我也用Q5，可以多多交流

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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。

10楼2017-08-28 11:13:12

Y野草Y

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有可能是高GC模板，可加5%DMSO，或10%甘油

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13楼2017-09-02 09:04:54

普通回帖

如梦如幻

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 793534187 at 2017-08-23 19:02:15
有没考虑过引物有问题呢……你这完全没带形没产物呀……

我也觉得引物有问题，我序列本身GC含量特别高，定点突变引物设计确实不好弄

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5楼2017-08-24 09:34:55

如梦如幻

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3楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-08-23 23:22:38
用了多少ng 质粒做模版？

70ng

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6楼2017-08-24 09:35:21

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4楼: Originally posted by 周大神 at 2017-08-24 03:05:28
这个确实不好说，还是像楼上说的从引物出发

突变引物设计多长比较合适啊，我GC含量高，怎么调整也会有发卡结构

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7楼2017-08-24 09:36:25