应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！对基因片段测序结果表示不解，求大神指导
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
381/4返回列表1234下一页
查看: 2652  |  回复: 37
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者米夏girl将赠送您 10 个金币

米夏girl

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助！对基因片段测序结果表示不解，求大神指导已有4人参与

我对炭疽属真菌的CHS（编号D）、TUB2（编号E）、CAL（编号F）三个基因片段分别进行了PCR扩增，并送公司测序。但是对测序结果表示很不理解，问题如图中标注： http://\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导\" http://\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导-1\"
问题说明
【1】图1中，样品D3、D5、D7、D11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“正向双峰”，请问造成这种结果的原因会有哪些？胶图显示为单一条带，但是测序结果为“正向双峰”，但是反向正常，这种现象是什么原因呢？
求助！对基因片段测序结果表示不解，求大神指导
【2】图2中样品E4、E2、E6、E10、E11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“反向双峰”，但正向是正常的。请问这是什么原因呢？
样品E9、E5、E7、E8条带清晰，但是结果为“双峰无条带，无法回收”，样品F2、F5也有清晰条带，测序结果为“信号弱\无信号”，请问造成上述结果的原因是什么呢？
求助！对基因片段测序结果表示不解，求大神指导-1
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2017-08-14 20:40:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bbass533

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
米夏girl: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-08-15 15:48:29
本帖内容被屏蔽
8楼2017-08-15 15:41:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是克隆到载体测序的还是PCR产物直接测序的，克隆到载体上测序一般不会出现这种情况（通用引物测序），PCR产物测序如果正向重叠峰而反向正常，说明产物是单一的，问题在引物上，测序引物在产物上还有高匹配序列，你可以用正向引物与序列做一个比对，可能还有一个高匹配位点，尤其3'端。

祝你实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
10楼2017-08-15 16:04:15
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

salomemao

新虫 (小有名气)
个人感觉还是构建载体比较靠谱，比较片段最后还是要在载体上才能表达，转染等。

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
女人一定要有自己的事业
16楼2017-08-16 10:48:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
17楼2017-08-16 10:51:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
米夏girl: 金币+5, ★★★很有帮助 2017-08-16 10:26:07
对的，这么短，只需要测一个方向就可以了，不需要测定双向，不过测序引物那一端有部分是测不出来的，如果不影响的话
赞一下(1人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
12楼2017-08-15 23:13:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 米夏girl at 2017-08-15 15:04:57
...

习惯就好，让你多测一次。也有可能他们加样没加好，或者用的是胶回收，然后没回收好。都有可能，建议下回用酶纯化法，不要用胶回收
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2017-08-16 08:41:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小小小虫牙

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2017-08-14 20:46:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小小虫牙 at 2017-08-14 20:46:26
有时候就会发生无论怎么搞都测不出来的结果

这咋整……再送一遍碰运气是么
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-14 21:27:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在的测序公司都爱这样，唉。就是让你多测几次，多收费呗。我也遇到很多次，明显不可能没有产物的嘛，结果显示浓度过低。要么就是测序无信号。习惯就好！
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-15 08:35:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔鬼的天使

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有可能是引物的问题？测序引物是不是不合适？或者测序引物降解之类的问题？
赞一下 回复此楼
自控，自信
5楼2017-08-15 14:15:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 魔鬼的天使 at 2017-08-15 14:15:45
有没有可能是引物的问题？测序引物是不是不合适？或者测序引物降解之类的问题？

我是个小白，不太懂哦~会不会存在引物在PCR扩增时好用，但是用到测序中就不好用了呢？所以我的结果一组样品全是反向双峰，一组样品全是正向双峰。
我的目的片段都是小于800bp 的，这样的情况下，我只拿到单向序列是不是就可以了呢？因为好多人说小于800bp的不需要测通。
请大神指教~
赞一下 回复此楼
6楼2017-08-15 15:04:12
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-08-15 08:35:35
现在的测序公司都爱这样，唉。就是让你多测几次，多收费呗。我也遇到很多次，明显不可能没有产物的嘛，结果显示浓度过低。要么就是测序无信号。习惯就好！

7楼2017-08-15 15:04:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米夏girl

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bbass533 at 2017-08-15 15:41:44
现在测序一般一个反应就可以测到800bp，所以你可以选择单向测序，到时候自己比对峰图就好了。
出现双峰，有很多可能啊。比如说有一条杂带存在，但是浓度很低，咱们肉眼看不见，但测序的时候就显现出来了。也有可能 ...

我是个小白，不太懂哦~拿到的序列和峰图对比时，一般是要对比些什么呢？有哪些注意事项呀？
求大神指导~
赞一下 回复此楼
9楼2017-08-15 15:50:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 米夏girl 的主题更新
381/4返回列表1234下一页
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 想问一下有没有需要文章但是没时间带学生的研究生导师。 +9 lekinna 2024-04-19 19/950 2024-04-20 05:35 by charles-c
[基金申请] 申请省自然科学基金，研究区能否是省外区域 100+3 喜欢兔兔的我 2024-04-15 13/650 2024-04-19 21:49 by 喜欢兔兔的我
[教师之家] 国内科研环境差导致国内科研水平差的根源 +3 zju2000 2024-04-18 3/150 2024-04-19 21:46 by songwz
[考博] 申请24博士 材料/化工/环境 +4 满目_星辰 2024-04-17 4/200 2024-04-19 20:10 by 前行的道路
[考博] 山东大学化学与化工学院刘磊课题组博士研究生招生启事 +3 sdorganic 2024-04-17 5/250 2024-04-19 17:04 by 368ghnf
[有机交流] 傅克酰基化，产率大于百分之一百，求解，很急 90+5 hsn991013 2024-04-15 11/550 2024-04-19 14:49 by scdxyouji
[论文投稿] 求助 100+3 guhangyu 2024-04-15 3/150 2024-04-19 08:48 by bobvan
[论文投稿] 国家重点研发计划论文可以发MDPI里的期刊吗 +4 lin_2018 2024-04-17 4/200 2024-04-19 08:46 by TsolmonZ
[论文投稿] 发个文章，结果被某学报请的外审PUA了 +3 ziniu168 2024-04-18 8/400 2024-04-18 21:40 by xli1984
[博后之家] 博后换方向可行吗？ +3 越越不暴躁 2024-04-15 3/150 2024-04-18 10:58 by ciompman
[博后之家] 博后进站年龄可以超过35岁？ +8 suesong0818 2024-04-14 8/400 2024-04-18 08:38 by charles-c
[考研] 求调剂化工学硕276 +14 星星陨落 2024-04-13 14/700 2024-04-17 22:57 by 华北刘兵
[考研] 274求调剂 +7 四个大字，你滴� 2024-04-14 10/500 2024-04-17 22:38 by 华北刘兵
[有机交流] 怎么清洗烧瓶 20+5 ww34523 2024-04-16 6/300 2024-04-17 15:20 by 591950582
[论文投稿] MDPI初审7天，是不是被拒 20+6 applegirl5762 2024-04-15 8/400 2024-04-17 08:49 by bobvan
[考研] 土木工程281求调剂 +4 乔兮木 2024-04-13 4/200 2024-04-16 21:40 by zjl渐行渐远
[基金申请] 迟国泰通过向学生发放劳务费再回收的方式套取科学基金重点项目 +6 babu2015 2024-04-13 7/350 2024-04-16 20:32 by sundiv
[考研] 312求调剂 +3 Lauhalo 2024-04-15 3/150 2024-04-16 10:16 by 19862091
[考研] 化学、材料类最后调剂机会！！！ +3 加油努力就好 2024-04-14 10/500 2024-04-15 09:05 by 任pen
[考研] 334求调剂 +4 学药救人 2024-04-13 6/300 2024-04-13 20:27 by 献世的王
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭