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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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xibaohaizi11

金虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质双向凝胶电泳实验问题咨询

本人最近在做蛋白质双向凝胶电泳实验，下图是几次试验中最好的一次（虽然论文里没法用），这次除上样量过大，IEF过程中发现杂质离子过多，还存在很多问题。求懂行的大侠帮忙解决一下问题所在？不胜感激！！！
    我是用TCA-丙酮法提取的蛋白，IPG strip pH4-7 18cm，蛋白浓度在4.2ug/ul，上样400ul+100ul水化液，平衡液I加0.15gDTT平衡15min，平衡液II加0.375gIAM平衡15min,0.5%的琼脂糖封胶液，考马斯亮兰R-250染色，IEF过程中8000v跑了5h多（42kv多），SDS-PAGE电泳，10mA 1h，30mA 5h。
    问题：1，开始的条纹是什么原因？（是平衡有问题？还是胶条与凝胶之间有小气泡的原因？）
             2，胶条与凝胶之间有小气泡，尝试多次压胶条，效果都不好，如何赶走气泡？

蛋白质双向凝胶电泳实验问题咨询
IMG_20170809_122315.jpg
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1楼2017-08-09 20:44:56
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892091690

银虫 (小有名气)
请问你的IPG胶条在运行前要过夜水化么？用什么buffer处理的呢？谢谢~
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你必须把必须走的路走漂亮，才可以走想走的路。
2楼2018-05-21 19:22:09
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xibaohaizi11

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 892091690 at 2018-05-21 19:22:09
请问你的IPG胶条在运行前要过夜水化么？用什么buffer处理的呢？谢谢~

水化过夜。没有用buffer
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3楼2018-08-27 09:26:59
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