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韩春苗

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师,您好,我最近做得酶切连接,基因和载体怎么也连不上,菌落...已有3人参与

老师,您好,我最近做得酶切连接,基因和载体怎么也连不上,菌落PCR也有条带,但,测序结果总是空载 @biostar2009

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ahopeanattitudealife
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这事被你说的。。

菌落PCR虽然不那么可靠,但是也不至于这么惨,不然也不会被人用
在一个经过苦日子的刻板生化实验手的脑壳里,测序才发现是空载,简直就是作孽,浪费科研资源!

所以你用的是什么引物做的菌落PCR,载体上的,还是插入片段上的?产物大小完全符合预期?如果是“100%”的阳性,那么你带了NC没有?

个人微信公众号:BoiledBiochemistry,可能会时不时吹吹牛扯扯淡
5楼2017-08-07 13:13:09
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普通回帖

极北小白熊

铁虫 (正式写手)

好好摸摸连接体系,可以的话连t载,,要是很急,可以给测序公司连,不是很贵。。

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2楼2017-08-06 16:19:07
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌落PCR的结果参考价值比较下,假阳性太厉害,还是以测序结果为准,可以在测序之前做一下质粒酶切验证。

平板上有残留连接产物,建议鉴定采用载体上引物加片段上引物,这样PCR阳性基本上就表明重组成功。
及时行乐,人生不留遗憾!
3楼2017-08-06 23:38:42
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌P的话,必须用载体上的引物结果才可靠,否则几乎100%假阳性。可以丢给我连
4楼2017-08-07 08:31:49
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star013

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

6楼2017-08-07 13:40:17
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rhjilio

新虫 (小有名气)

7楼2018-02-14 05:52:10
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