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神雕哥

木虫 (正式写手)

[求助] 做过植物多糖的高手请进已有2人参与

本人用50%乙醇提取植物中的低分子量多糖。植物经无水乙醇脱脂后,残渣干燥后,用50%乙醇提取低分子量多糖,提取液经脱蛋白,脱色后,加无水乙醇至醇浓度90%左右醇沉,得沉淀加水复溶后冻干,冻干样品过DEAE-Sepharose FF(GE)时,依次用水,0.1、0.3、0.5、0.7M氯化钠洗脱,得到中性部分(得率70%左右),中性部分继续过G-75凝胶(GE)纯化的单一峰(产率70%左右),苯酚硫酸法验证收集。收集液从DEAE-Sepharose FF(GE)和G-75凝胶纯化时,都显淡淡的蓝色(见图),不知道怎么回事。最后G75纯化后的单峰冻干,得到的冻干物水溶性很好,而且白中透着淡淡的蓝色(见图)。有知道是什么情况的吗?
还有就是冻干品我称取1mg溶于10mL水后,用苯酚硫酸法测定时,显色很浅,全波长扫描时在480nm有最大吸收峰,但吸收比较弱,我用相同浓度的葡萄糖做苯酚硫酸时,颜色正常,比较深。
综上问题1:样品为什么会带有淡淡的蓝色(自始至终没接触过其他带有颜色的物质)
      问题2:苯酚硫酸法显色为什么很弱
     问题3:我怀疑我得到的样品不是糖类,但是我是按照多糖提取分离的方法处理的。如果不是多糖,可能是什么物质
请大家帮忙解惑。
做过植物多糖的高手请进
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做过植物多糖的高手请进-1
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celan

专家顾问 (职业作家)

有机波谱分析 化学品成分剖析


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-08-02 10:05:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 神雕哥 at 2017-08-01 15:59:18
谢谢,请问可以加个好友吗...

可以。我大学也是药学毕业,80年代初就开始从事NMR和波谱综合解析。用NMR监测样品结构类型,混合程度,杂质情况非常有用,通常比学校专业课学习的颜色反应判断化合物类型更有用。有一点很重要,就是要有NMR知识。。。。。

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6楼2017-08-01 16:55:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

唐跳跳_hero

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+10, 有帮助 2017-08-01 15:20:31
样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色,但是脱色不完全,你在95%乙醇醇沉多糖时,你的糖有颜色吗?冻干后有颜色吗?这个你需要查证一下,另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅,可能是你的样品配置的浓度太低,一般来说浓度为0.1-0.01mg/ml最为适宜
还有一种可能会不会是楼主的样品含糖量太低,加上操作过程中的损耗,所以多糖的得率很低
2楼2017-07-31 15:29:14
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celan

专家顾问 (职业作家)

有机波谱分析 化学品成分剖析


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2017-08-01 16:03:32
楼主真是辛苦了,大热天的。
取50%乙醇提取物测定1H和13CNMR,是不是多糖,杂质情况如何,很容易判定,然后是定继续化学实验的步骤。方便快捷,我就是这样做的。
4楼2017-08-01 15:32:01
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普通回帖

神雕哥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐跳跳_hero at 2017-07-31 15:29:14
样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色,但是脱色不完全,你在95%乙醇醇沉多糖时,你的糖有颜色吗?冻干后有颜色吗?这个你需要查证一下,另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅,可能是你的样品配置的浓度太低,一般 ...

醇沉多糖时,多糖是黄色,水溶冻干后也是黄色,苯酚硫酸法我配的浓度为0.1mg/mL
3楼2017-08-01 15:21:48
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神雕哥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by celan at 2017-08-01 15:32:01
楼主真是辛苦了,大热天的。
取50%乙醇提取物测定1H和13CNMR,是不是多糖,杂质情况如何,很容易判定,然后是定继续化学实验的步骤。方便快捷,我就是这样做的。

谢谢,请问可以加个好友吗
5楼2017-08-01 15:59:18
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dseager

新虫 (小有名气)

7楼2017-08-02 00:00:39
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dseager

新虫 (小有名气)

8楼2017-08-02 00:01:00
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神雕哥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dseager at 2017-08-02 00:00:39
做个定性鉴别啊

能说具体点吗
9楼2017-08-02 09:14:55
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神雕哥

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dseager at 2017-08-02 00:01:00
奈酚实验

谢谢,你说的是molish反应吧,我做了,取5gα奈酚用95%乙醇溶解至100mL。取样品溶液1mL,加2滴molish试剂,再加1mL浓硫酸,中间出现了个紫色的环。
10楼2017-08-02 09:53:41
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