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[交流]
有RACE经验的前辈解答一下我的设计引物的小问题吧
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| 我是RACE的新人，准备做这个，现在设计引物不太会啊，不太明白3‘RACE引物设计这一块，我已知了cDNA片段，那么我设计的3‘RACE的引物是应该与已知cDNA序列互补的对吗，并且是靠近5’端的？ |
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2017-03-10 07:42:09
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利用3'的poly尾序列设计引物，和目的基因3'序列反向互补。利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA.然后用一个基因特异引物GSP1（gene specific primer，GSP）作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-02-23 10:10:34
5楼2017-02-23 10:12:27
6楼2017-02-23 12:23:50
7楼2017-02-23 13:54:28
8楼2017-02-28 16:44:47
9楼2017-03-06 20:50:24
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:42:29
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-10 07:42:29
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我觉得 GSP1应该是cDNA第一条链某部分一样的这个属于5”race 的引物 而3”的GSP2是和cDNA第一条链上序列反向互补的 这是我这两天看懂后的结论 你觉得对嘛 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2017-03-06 20:53:30
11楼2017-03-06 22:24:25
12楼2017-03-09 17:50:59
13楼2017-03-09 17:53:50
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14楼2017-03-09 23:55:12
15楼2017-04-09 12:18:34
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dsctg2楼
2017-02-23 09:53
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dsctg3楼
2017-02-23 09:54
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