| 查看: 6098 | 回复: 5 | |||||
[交流]
RNAi表达载体构建
|
|
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义,它不仅深入揭示 了细胞内基因沉默的机制,而且它还是后基因组时代基因功能分析的有力工具,极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程.现在越来越多的研究人员开始采用RNAi 来研究生物体的基因表达.RNAi技术可广泛应用到包括功能基因组学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等等. 目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括： ·化学合成 ·体外转录 ·长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III) ·siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs ·PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 获得高纯度的siRNA产物是进行实验的第一步,而转染的效率则是非常关键的因素. 一、基本概念 RNAi：（RNA interference）RNA干扰 内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的能诱导细胞内与其序列同源的特异基因表达沉默或抑制的效应,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰,它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制. siRNA ：(small interfering RNAs)小干扰RNA 由长dsRNA裂解而成的一种19-25nt的短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的RNA为靶目标降解特定的mRNA, RNAi的关键效应分子. shRNAs  small hairpin RNA )小发夹RNA是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子,shRNA需通过载体导入细胞后,然后利用细胞内的酶切机制得到siRNA而最终发挥RNA干扰作用. Dicer：属于RNaseⅢ 家族,是dsRNA的特异性核酸内切酶 RISC：(RNA-inducing silencing complex) RNA诱导的沉默复合体,具有核酸内切、外切以及解旋酶活性 二、机制 目前普遍认为,共抑制、基因压制和RNAi很可能具有相同的分子机制,都是通过dsRNA的介导而特异地降解靶mRNA, 抑制相应基因的表达. 即RNAi、共抑制、quelling均属于PTGS！现已初步阐明dsRNA介导的同源性靶mRNA降解过程主要分为两步. 第一步（起始阶段）是较长ds RNA在ATP参与下被RNaseⅢ样的特异核酸酶切割加工成21~23nt的由正义和反义链组成的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）. 第二步（效应阶段）是siRNA 在ATP参与下被RNA解旋酶解旋成单链,并由其中反义链指导形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC). RNAi途径主要存在于细胞浆中,但是siRNA产生、靶mRNA降解的亚细胞位置尚未明确.外源性（注射或喂养）的dsRNA和病毒性dsRNA可能可以直接进入细胞浆中的RNAi途径,仅在细胞浆中复制的RNA病毒可被dsRNA介导的沉默机制所抑制.外源性dsRNA则还可导致细胞核中的同源早期 RNA转录产物减少. 在许多机体中反向重复转基因序列在细胞核内转录成发夹dsRNA,进而可介导RNAi,这种dsRNA可能需要转移至胞浆中才可有效地沉默同源靶mRNA. RNAi的放大效应机制 siRNA不仅可引导RISC切割靶RNA,而且可作为引物在RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)作用下以靶mRNA为模板合成新的dsRNA. 新合成的长链dsRNA同样可被RNaseⅢ样核酸酶切割、降解而生成大量的次级siRNA.次级siRNA又可进入合成-切割的循环过程,进一步放大RNAi作用.这种合成-切割的循环过程称为随机降解性PCR（random degradative PCR）. 三、RNAi表达载体的构建 1. 目的基因的确定 （1）、检索文献获取有实验证明有效的靶点序列（核对） （2）、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ （3）、http://www.google.cn/ or http://scholar.google.com 2、设计siRNA靶序列 在制备siRNA 前都需要单独设计siRNA序列.研究发现对哺乳动物细胞,最有效的siRNAs是21-23个碱基大小、3’端有两个突出碱基的双链RNA；而对非哺乳动物,比较有效的是长片段dsRNA.siRNA的序列专一性要求非常严谨,与靶mRNA之间一个碱基错配都会显著削弱基因沉默的效果. （1）、选择siRNA靶位点： 从转录AUG起始密码子开始,搜寻下游AA序列,记录跟每个AA 3’端相邻的19个核苷酸作为候选的siRNA靶位点.有研究结果显示GC含量在30%—50%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效. Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编码区（untranslated regions,UTRs),原因是这些地方有丰富的调控蛋白结合区域,而这些UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNP核酸内切酶复合物结 合mRNA从而影响siRNA的效果. （2）、序列同源性分析: 将潜在的序列和相应的基因组数据库（人,或者小鼠,大鼠等等）进行比较,排除那些和其他编码序列/EST同源的序列.例如使用BLAST（ www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）选出合适的目标序列进行合成.并非所有符合条件的siRNA都一样有效,其原因还不清楚,可能是位置效应的结果,因此对于一个目的基因,一般要选择3-5个靶位点来设计siRNA. 通常来说,每个目标序列设计3—4对siRNAs,选择最有效的进行后续研究. （3）、设计阴性对照： 一个完整的siRNA实验应该有阴性对照,作为阴性对照的siRNA应该和选中的siRNA序列有相同的组成,但是和mRNA没有明显的同源性.通常的做法是将选中的siRNA中的碱基序列打乱.当然,同样要保证它和其他基因没有同源性. 3、RNAi表达载体的选用 化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内,但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点：siRNA进入细胞后容易被降解；进入细胞siRNA在细胞内的 RNAi效应持续时间短.针对这种情况,出现了质粒、病毒类载体介导的siRNA体内表达.该方法的基本思路是：将siRNA对应的DNA双链模板序列克隆入载体的RNA聚合酶III的启动子后,这样就能在体内表达所需的siRNA分子.这种方法总体的优点在于不需要直接操作RNA,能达到较长时间的基因沉默效果. 通过质粒表达siRNAs大都是用Pol III启动子启动编码shRNA(small hairpin RNA)的序列.选用Pol III启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA,遇到4—5个连续的U即终止,非常精确.当这种带有Pol III 启动子和shRNA模板序列的质粒转染哺乳动物细胞时,这种能表达siRNA的质粒确实能够下调特定基因的表达,可抑制外源基因和内源基因.采用质粒的优点在于,通过siRNA表达质粒的选择标记,siRNA载体能够更长时间地抑制目的基因表达.当然还有一点,那就是由于质粒可以复制扩增,相比起其它合成方法来说,这就能够显著降低制备siRNA的成本. 此外,带有抗生素标记的siRNA表达载体可用于长期抑制研究,通过抗性辅助筛选,该质粒可以在细胞中持续抑制靶基因的表达数星期甚至更久.同时RNAi-Ready表达载体还能与逆转录病毒和腺病毒表达系统整合（BD Knockout RNAi Systems）,大大提高siRNA表达载体对宿主细胞的侵染性,彻底克服某些细胞转染效率低的障碍,是实现哺乳动物细胞siRNAs瞬时表达与稳定表 达的理想工具. 4、合成模板 合成编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamH I 和 Hind III 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamH I 和 Hind III 酶切位点之间. 95℃,5min,缓慢退火, DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板 5、连接与转化 基本步骤： （1）将100μl感受态细胞于冰上解冻. （2）取5μl连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以 混匀内容物. 在冰上放置30分钟. （3）将管放入预加温到42℃的水浴中,热激90秒.快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却1~2分钟. （4）每管中加700μl LB培养基,37℃振荡培养1小时,进行复苏. （5）室温4,000rpm离心5分钟,弃去上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含抗性的LB琼脂平板表面.注意：细胞用量应根据连接效率和感受态细胞的效率进行调整. （6）将平板置于室温直至液体被吸收. （7）倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落. 6、PCR鉴定和测序鉴定 在插入编码shRNA的DNA双链模板两侧设计鉴定PCR引物,扩增片段在100-200bp之间. 7、特点 siRNA表达载体的优点在于这是众多方法中唯一可以进行长期研究的方法——带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达,持续数星期甚至更久.即使是对转染带有筛选标记质粒的细胞进行瞬时筛选,也有助于富集带质粒的细胞.这也可以帮助解决一些难转染的细胞由于转染效率低造成的问题. 载体上的抗性标记有助于快速筛选出阳性克隆,而且可以在细胞中持续抑制靶基因的表达,持续数星期甚至更久,可以进行较长期研究 . 四、RNAi的前景展望 1、研究基因功能的新工具 已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达,制作多种表型,而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段,产生类似基因敲除的效应.线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕,发现大量未知功能的新基因,RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究.与传统的基因敲除技术相比,这一技术具有投入少,周期短,操作简单等优势,近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道日益增多,标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具. 2、研究信号传导通路的新途径 联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果,在此基础上分析了DSH3PX1与DACK之间的关系, 证实了DACK是位于DSH3PX1磷酸化的上游激酶. RNAi技术较传统的转染实验简单、快速、重复性好,克服了转 染实验中重组蛋白特异性聚集和转染效率不高的缺点, 因此认为RNAi技术将可能成为研究细胞信号传导通路的新途径. 3、开展基因治疗的新策略 RNAi具有抵抗病毒入侵,抑制转座子活动,防止自私基因序列过量增殖等作用,因此可以利用RNAi现象产生抗病毒的植物和动物,并可利用不同病毒转录序列中高度同源区段相应的dsRNA抵抗多种病毒. 肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果,传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长, 而RNAi可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性, 设计针对这一区段序列的dsRNA分子,只注射一种dsRNA即可以产生多个基因同时剔除的表现,也可以同时注射多种dsRNA而将多个序列不相关的基因同时剔除. 尽管目前RNAi技术在哺乳动物中的应用还处于探索阶段,但它在斑马鱼和老鼠等脊椎动物中的成功应用预示着RNAi将成为基因治疗中重要的组成部分,人工合成的dsRNA寡聚药物的开发将可能成为极具发展前途的新兴产业. |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 收集资源 | 科研沉淀 |
» 猜你喜欢
博士论文被抄袭
已经有24人回复
-
研二光催化6月底四篇二区什么水平
已经有7人回复
-
申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区
已经有4人回复
-
博士白读了
已经有33人回复
-
颜宁:基础研究应顶天立地,立地即从需求端作为问题的出发点,立项背景就是面向真实需求
已经有10人回复
-
真的好想读博！
已经有6人回复
-
发现督导在听课，需要跟TA招呼示意吗？有同学看手机、课件有疏漏算大问题吗？
已经有10人回复
-
找工作过程中碰到好多人问南京某新换校长211的政策，规定如下
已经有16人回复
-
有偿收购废弃锂硫电池
已经有5人回复
-
国内科研环境差导致国内科研水平差的根源
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
 |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：libolin3@tal.com - 附件 1 : 汉恒生物技术文件-AAV腺相关病毒操作手册.pdf
2016-08-23 14:43:33, 717.46 K
2楼2016-08-23 14:45:19
 |
3楼2016-08-30 10:48:19
|
2016第七届国际基因产业大会 会议介绍： 第七届国际基因产业大会将于2016年11月3-5日在上海外高桥喜来登酒店举办，大会已经成功举办过六届，已成为全球生物医药产业领域重要会议之一，本届会议邀请到国内外著名院士、世界著名基因技术公司高管，还有来自世界40多个国家和地区在基因领域最具影响力的专家、学者、500强制药企业高管、著名科研院所的资深科学家和项目组长领衔主讲，将向世界传递DNA和RNA的研究、基因组学和遗传学的进步、生命科学的前沿研究、医学应用的新兴领域、生物催化和生物工艺、基因技术在农业和食品领域的开发和应用等热点话题，共计20多场专业分会论坛。为专家学者、企业精英、各相关组织机构和个人搭建集国际性与专业性于一体的专题演讲和交流合作的平台。 我们盛情邀请相关领域的专家学者出席本届会议，大会主要活动包括主题报告、科技论坛、专题讨论会、展览展示、海报展示、高端人才招募洽谈会等多种形式，将为参会人员提供最前沿的科技资讯、传递行业发展趋势和最新动向，期待着2016年11月与您共聚上海！。 关于更多信息，可直接登录大会官网： http://www.bitcongress.com/wgc2016/cn 主题论坛： 2016年11月3日8：30-12：00开幕式及主题论坛 题目：癌症治疗的革命性策略-靶向双基因疗法 刘新垣院士，中国科学院上海生命科学研究院研究员 题目：如何通过创新的环保方法对植物病害起到控制作用从而有助于食品安全 Ilan Chet博士，以色列耶路撒冷希伯来大学教授 题目：Porosome：细胞中通用的分泌机制 Bhanu P. Jena博士，美国韦恩州立大学特聘教授 题目：实现基因组医学的挑战:梅奥研究中心的个性化医疗 Richard M. Weinshilboum博士，美国梅奥诊所教授 题目：待定 Eugene Howard Seymour博士, 美国NanoViricides公司首席执行官 题目：丙肝病毒载量测定与影响 Gabrielle Heilek博士, 美国罗氏制药国际集团主任 分会论坛部分演讲嘉宾 Yingli Sun博士，中国科学院北京基因组研究所教授 Wen-Ping Lin博士，中国福建医科大学第二附属医院 Ju-Wei Mu博士，中国协和医科大学副主任/教授 Changliang Shan博士，中国暨南大学教授 Dan Jin博士，中国南方医科大学南方医院副教授 Yan-Dong Wang博士，中国北京化工大学教授 Zhenquan Hu博士，中国科学院高磁研究室 Wei-Dong Chen博士，中国河南大学 Weiying Lin博士，中国济南大学教授 Fengyu Li博士，中国科学院绿色印刷重点实验室副教授 Chih-Ming Chiang博士，中国四川大学副教授 Toru Shimizu博士，中国汕头大学医学院教授 Yue Hugh Guan博士，中国华东科技大学教授 Yin-bo Gan博士，中国浙江大学教授 Li Liang博士，中国江南大学教授 Wen-Tao Qi博士，中国科学院国家粮食局副研究员 Lingwen Zeng博士，中国武汉市农业环境安全检测研究院教授 Yanzhen Bi博士，湖北省农业科学院畜牧兽医研究所教授 Xin Guan博士，中国西南大学副教授 Xingming Fan博士，中国云南省农业科学院研究员 Xiaojie Li博士，中国科学院东北地理与农业生态研究所副教授 Yuelin Zhang博士，中国香港大学 Zhigang Liu博士，中国玉溪师范大学 Yueyun Ma 博士，中国第四军医大学教授 Mu-Zon Wu博士，中国台湾国立台湾大学讲师及副主任医师 Shu-Hui Liu博士，美国辉瑞公司主任 Richard Wang博士，美国CBMG首席运营官 Warren C. Ladiges博士，美国华盛顿大学比较医学系比较鼠基因组中心主任 Shisheng Li博士，美国路易斯安那州立大学教授 Sushela Chaidarun博士，美国达特茅斯希区柯克医学中心副教授 Robert W. Li博士，美国农业部首席科学家 Xiaorong Feng博士，美国军方医学研究中心首席科学家 Yun Tang博士，美国罗氏基因泰克公司副主任 Jan Davidsson博士，瑞典乌普萨拉大学教授 Chia-chi Liu博士，澳大利亚悉尼大学高级研究员 Katherine J Aitchison博士，加拿大阿尔伯塔大学教授 Richard M. Weinshilboum博士，美国Mayo Clinic教授 Judah A. Denburg博士，加拿大AllerGen NCE科学主任兼首席执行官 Ian Martins博士，澳大利亚埃迪斯科文大学首席研究员 Douglas T. Carrell博士，美国犹他州立大学医学院教授 Jeffrey Pudney博士，美国波士顿大学医学中心教授 Douglas T. Carrell博士，美国犹他州立大学医学院教授 Susan D Rich博士，美国第七代基金会公司首席执行官 John Sanghyun Lee博士，韩国崇实大学教授 Marion Nagy博士，德国柏林洪堡大学专家 Alexander Kharazi博士，美国Stemedica细胞技术公司首席技术官 Richard Wang博士，美国CBMG首席运营官 Yuyou Duan博士，美国加州大学戴维斯分校医学中心教授 Ruggero Rodriguez y Baena博士，意大利帕维亚大学教授 Antonella Cotoia博士，意大利福贾大学教授 Qi Wei博士，美国科罗拉多州儿童医院主任 Ming Wei博士，法国Cellvax公司总裁兼首席执行官 Xia Liu博士，加拿大Canadian Light Source公司 Ben Chih博士，美国基因泰克公司生化和细胞药理学科学家 Qiao Li博士，加拿大渥太华大学副教授/首席研究员 Bing Yuan博士，香港现代中药研发中心有限公司教授 Daniel Scherman博士，法国国家科学研究中心教授、主任 Songyan Zheng博士，美国百时美施贵宝公司副主任 Emily Leproust博士，美国Twist Bioscience公司总裁 Felix Schiele 博士，德国勃林格殷格翰制药公司首席科学家 Bernard Vanhove博士，法国OSE Immunotherapeutics公司首席运营官 Jian-Dong Li博士，美国乔治亚州立大学乔治亚研究联盟杰出学者教授兼主任 Marie-Pierre Piccinni 博士，意大利佛罗伦萨大学教授 Andy Yen-Tung Teng博士，美国罗切斯特大学教授、主任 C.Pat Bagley博士，美国田纳西理工大学奥克利可持续农业中心教授兼主任 Steve Jackson博士，英国华威大学生命科学学院教授 Eugene Howard Seymour先生，美国NanoViricides 公司首席执行官 George Acquaah博士，美国鲍威州立大学院长 Yue Yun博士，美国先锋良种国际有限公司 Nigel G. Halford博士，英国洛桑研究所研究组长 Dominique Desclaux博士，法国农业科学研究院主任 Giancarlo Colelli博士，意大利福贾大学教授 Vinay Bhardwaj博士，美国西卡罗莱纳大学研究科学家 Sayandro Versteylen博士，美国Paper Pak Industries公司副总裁 大会亮点: 100+ 基因产业领域热点话题 300+ 基因产业最新发展的专业演讲 100+ 科学海报展示最新研究成果 50+ 企业将展示最新产品、技术和服务 500+ 全球专家学者、企业界代表欢聚一堂 科技论坛（演讲语言为英语）以网站安排为准 11月3日13：30-17：00 论坛1-1：聚焦RNAi, miRNA技术和热点技术 论坛2-1：基因组学和人类疾病遗传学 论坛3-1：计算生物学、结构生物学、生物信息学和生物统计学 论坛3-2：分子与细胞生物学（I） 论坛4-1：基因组医学与个性化医学的当前趋势 论坛4-2：现代生殖医学 论坛4-3：法医DNA的新成果 论坛 5-1：基因与药物的研究发现 论坛6-1：医药生物技术 论坛 8-1：生物催化与酶 论坛 9-1：植物生物化学与生理学 论坛10-1：农业支柱产业 论坛 13-1：风味化学，食品化学与食品物理学 论坛14-1：食品经济，卫生，质量与安全控制 11月4日全天分会论坛 论坛1-2：DNA、RNA的最新研究 论坛1-3：RNA 生物学, 核酸, 结构和功能基因组学 论坛2-2：非人类遗传学与基因组学模型研究 论坛3-2：分子与细胞生物学（II） 论坛3-3：细胞凋亡、自噬细胞死亡 论坛3-4：微生物学、微生物组研究和宏基因组学 论坛3-5：蛋白质与蛋白质组学 论坛4-4：干细胞与再生（I） 论坛4-4：干细胞与再生（II） 论坛4-5：分子医学与分子诊断技术的尖端研究 论坛5-2：基因与细胞治疗 论坛5-3：疾病抗体/疫苗（I） 论坛7-1：影像技术 论坛9-2：植物病理与微生物 论坛9-3：基因组学与植物遗传学 论坛11-1：农业创新技术 论坛12-1：以农业为基础的能源，经济与可持续发展 论坛13-2：食品微生物，发酵与酿造 论坛 16：食品，饮食与疾病管理 11月5日全天分会论坛 论坛4-4：干细胞与再生（IIl） 论坛4-6：新兴癌症/肿瘤标志物，途径和目标 论坛5-3：疾病抗体/疫苗（II） 论坛5-4：新兴的新型免疫和免疫治疗 论坛6-2：纳米生物技术和纳米医学 论坛7-2：分析技术，生物芯片，基因芯片，基因表达分析和微流控新芯片及实验室级芯片 论坛9-4：植物改良和育种研究 论坛15-1：食品加工与包装技术 论坛17-1：食品分析与检测技术 参会价格 大会分为参会票、餐饮票两种参与方式，并设有论文投递及学术展板展示，详情如下： 1）参会票：2000元起 参会票包含：可参加会议所有论坛，会议期间茶歇，会议资料1份。 2）餐饮票：2800元起 餐饮票包含：可参加会议所有论坛，会议期间午餐，会议期间茶歇，会议第一天欢迎晚宴，会议资料1份，学术展板1块或投递论文1篇。 学生票半价，只针对参会票 目前，科技论坛演讲，大会征集论文摘要、学术海报、企业展览正在招募中，欢迎踊跃报名并诚邀赞助单位！ 报名链接：http://www.bitcongress.com/wgc2016/cn/zhuce.asp （三人以上注册参会票可享受团体优惠，详情请联系会务组。） 学术展板 一．展示时间：2016年11月3 -5日 二．展示形式：招贴画展 (Poster Session) 三．展板尺寸：70CM(宽)×90CM(高) 企业展览 展览范围:科学仪器、实验设备、试剂、 消耗品、生物医药制剂、技术服务、外包、 媒体及杂志等 展位价格及内容 标准展位： 9000元起，越早报名价格越优惠。 包含内容：中英文对照公司楣板一条，咨询桌1张, 椅子2把, 电源插座1个，射灯2盏。 标准展位所包含服务: 1） 展位一个（11月3-5日 )，11月2日下午布展 2） 赠送1 张参会票(含会议期间茶歇、午餐、欢迎晚宴和资料袋) 3） 赠送5个免费参会名额 4） 在会议网站首页放置参展公司 LOGO，并链接到参展公司网站 5） 在会刊扉页展商列表中印刷参展公司LOGO 6） 在会刊内刊印参展商200字左右中英文对照版的企业介绍并附联系方式 7） 会后发放所有参会人员以及参展单位通讯录 赞助机会 大会诚邀赞助单位 为进一步体现“加强合作、优势互补、资源共享、共同发展”的宗旨，为企业提供一个诠释企业文化、推介自我的舞台，特征集赞助合作单位，根据企业的贡献量身定做各种回报方案，达到企业预期目标，详细赞助方案请咨询会务组。 赞助优势 与行业精英面对面交流的绝佳机会。 了解最前沿技术和产品的第一选择。 与潜在的合作伙伴面对面地谈论合作方案。 提高贵公司技术产品的品牌认可。 为贵公司带来无限商机和现场签单的机会。 提高您个人的国际知名度。 与政府相关部门负责人沟通的绝佳机会。 我们殷切地期待您的加入，并在这个国际平台上向您的国内外同行分享您的知识与远见！ 报名链接：http://www.bitcongress.com/wgc2016/cn/zhuce.asp 联系方式： 2016第七届国际基因产业大会会务组 联系人：张圆 电话：0411-84575669-851 手 机：15041134922 Q Q : 13409281 邮 箱：kira@bitconferences.cn 地址：大连市高新园区汇贤园1号11号 |
4楼2016-09-09 10:03:40
5楼2016-10-09 11:27:48
6楼2020-02-17 15:51:48
10