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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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袁小小然

银虫 (正式写手)

[求助] 茚三酮比色法测氨基酸含量已有4人参与

用茚三酮法测定氨基酸含量,有几个疑问:
1、2%茚三酮溶液,要加入40mg的氯化亚锡。这里的氯化亚锡的作用是什么呢?防腐剂吗?
   还有,茚三酮加入热水后很好溶解,但是加入氯化亚锡之后,就出现了沉淀,并且很难溶解,只能过滤才能除去。这是不是说明氯化亚锡难溶于水?
   既然都难溶,那这里岂不是没有起到防腐剂的作用了啊??
2、这里要用到pH6.7的磷酸盐缓冲液,这里缓冲液的作用是什么啊? 万一我缓冲液pH值没有配好,是6.9或者6.5,对实验有没有很大的影响呢?
3、把氨基酸溶液、茚三酮溶液、缓冲液加热15min之后,迅速冷却。这里为什么要迅速冷却啊?? 即使缓慢冷却,不同组实验冷却的时间应该是一样的啊?我觉得冷却时间不该不会对实验造成干扰吧??!
4、为啥我做标准曲线,中间的数值很大呢??做这个实验,有没有一些特别注意的经验技巧呢?虽然特别简单,但是我做了好几次,都没有出现0.9,都是0.7-0.8。
并且,我可以肯定,我的试剂的量没有加错!出现这种情况,我都想不出来原因! 有没有经验之谈啊???哪里有特别注意的地方啊?
问题有点多,希望虫友耐心帮我解答一下!谢谢谢谢!!

茚三酮比色法测氨基酸含量
标准曲线.PNG
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袁小小然

银虫 (正式写手)

缓冲液配制之后,一般可以放置多久啊?? 一周还可以用吗?
3楼2016-08-18 10:23:09
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普通回帖

袁小小然

银虫 (正式写手)

这里的氨基酸标准溶液可以用 异亮氨酸吗?? 还是说只能用茶氨酸或谷氨酸??
2楼2016-08-18 10:19:42
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杨洁29

新虫 (小有名气)

你那个曲线上的r是怎么算的啊??

发自小木虫Android客户端
4楼2016-08-18 10:38:40
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袁小小然

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 杨洁29 at 2016-08-18 10:38:40
你那个曲线上的r是怎么算的啊??

你说的是R2=0.7036那个吗?? 
你用excel可以直接算出来啊!你鼠标放在曲线上面,点击右键,设置趋势线格式,然后最下面有一个显示R平方值和显示公式,你直接勾选就出来了!
5楼2016-08-18 11:12:24
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品,天然产物分离纯化


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
茚三酮显色的原理,其实就一个化学反应产生的颜色变化,所以不同的氨基酸反应活性不一样,所得到的标准曲线肯定也是有差别的,如果是仲胺和伯胺,那差别可能会更大;另外我觉得你这个标准曲线相关性比较差的原因,可能是跟浓度和时间有关系,因为不同浓度的氨基酸,和茚三酮反应的程度会不一样,所以会出现线性差的情况
6楼2016-08-19 11:27:32
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123123厦

新虫 (小有名气)

做标曲时,量取的溶液要精准,比色管洗干净一点,反正很多细节都要注意的,不行的话可以尝试用另外一台分光光度计

发自小木虫Android客户端
7楼2016-08-20 22:14:33
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zhengee

新虫 (正式写手)

你这R平方不对劲儿啊   差太多了

发自小木虫Android客户端
8楼2016-08-21 17:15:32
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袁小小然

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhengee at 2016-08-21 17:15:32
你这R平方不对劲儿啊   差太多了

嗯,确实差点有点多,那我的标准曲线可以从100或者200开始绘制吗?不要(0,0)可以吗?
9楼2016-08-21 22:55:30
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袁小小然

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-08-19 11:27:32
茚三酮显色的原理,其实就一个化学反应产生的颜色变化,所以不同的氨基酸反应活性不一样,所得到的标准曲线肯定也是有差别的,如果是仲胺和伯胺,那差别可能会更大;另外我觉得你这个标准曲线相关性比较差的原因,可 ...

但是我同一批实验都是用的是同一种氨基酸,加热冷却时间也都是一样的啊?
10楼2016-08-30 14:36:57
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