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raopian

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因植物检测如何排除农杆菌干扰，或者提供其他思路~~

是这样的，转基因的抗性植物提取DNA后，但是由于农杆菌没有脱干净，基因组DNA中可能是带质粒DNA的，用通用引物PCR检测的时候，所有的样本DNA都能P到目的条带，所以就没办法检测了。我试过做切胶回收了，但是没有什么分离效果，所有的DNA依然能够P出产物~~so,有大神能够提供一点方法去分开农杆菌干扰么，除去质粒DNA，或者其他的检测方法之类的~~~对了，我的载体没有荧光蛋白或者GUS。。。。。。
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1楼2016-06-21 20:15:36
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M1182

版主 (文坛精英)

聪聪家族

优秀版主
这个问题不好说，也有可能是你引物的问题。你的阳性对照和阴性对照都有吗？
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2楼2016-06-21 22:05:48
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raopian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by M1182 at 2016-06-21 22:05:48
这个问题不好说，也有可能是你引物的问题。你的阳性对照和阴性对照都有吗？

做了阴性对照，没有，，阳性的木有做~~引物没有问题应该，前面所用的菌检测的时候都正常~~~
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3楼2016-06-23 18:59:53
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Neo2000

木虫 (著名写手)
你干嘛纠结这个问题，后面不是还有RNA和蛋白可以检测吗？

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4楼2016-06-23 20:10:33
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raopian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-06-23 20:10:33
你干嘛纠结这个问题，后面不是还有RNA和蛋白可以检测吗？

并没有，我做删除~~只能说对靶点测序，但是这样的话每个样本都要克隆测序了~~~先用通用方法可以筛一遍~~而且载体转进去了也不一定靶点有变化~~所以要先确定是不是转进去了
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5楼2016-06-24 09:23:18
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by raopian at 2016-06-24 09:23:18
并没有，我做删除~~只能说对靶点测序，但是这样的话每个样本都要克隆测序了~~~先用通用方法可以筛一遍~~而且载体转进去了也不一定靶点有变化~~所以要先确定是不是转进去了...

那你在转化前，植株对抗性的敏感度测试做了吗，如果很敏感，一般有抗性的基本都转进去了，假的很少或者没有

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6楼2016-06-24 09:30:29
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raopian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-06-24 09:30:29
那你在转化前，植株对抗性的敏感度测试做了吗，如果很敏感，一般有抗性的基本都转进去了，假的很少或者没有
...

杨树，对抗性不是很敏感好像，潮霉素的话浓度3-4就死了，放到2的话能长芽，但是芽生根只能用1的浓度~~依师兄师姐的说法，基本上十株检测出一株，转化效率没有那么高好像~~~
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7楼2016-06-24 14:58:13
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你太善良

新虫 (著名写手)
提rna，用cDNA跑呗，或者DNA northern杂交

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8楼2016-06-24 16:45:15
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飞凤

新虫 (初入文坛)
楼主能不能说一下杨树转基因应该注意那些啊
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9楼2017-06-20 23:36:23
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raopian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞凤 at 2017-06-20 23:36:23
楼主能不能说一下杨树转基因应该注意那些啊

亲也是做这个？我已经不做了~~~~
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10楼2017-10-24 18:10:31
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