毕赤酵母蛋白表达不出来…
求助各位虫友们，我的毕赤酵母GS115+载体ppic9k，蛋白大小不到20kD，前面的步骤都做的没问题，也进过核酸电泳验证过了，可是到了蛋白表达这一步，就是不表达…
跑蛋白电泳
1，浓度太低，直接跑基本没东西。试过TCA和PEG浓缩之后，条带与空白对照没有相应条带。
2，经过镍柱纯化之后基本没有了…这样应该就是没有表达出来了。也用考马斯检测的试了一下，基本蓝色程度很低，说明蛋白不多。
基本新手，实验室没有人做过相应的内容，问了很多朋友，但是做的东西不太一样，想请教一下朋友们这下要怎么办呢，感激不尽
ps：调整pH的方法还在做，周期较长，换菌种载体什么的也不太清楚是否可以表达…
返回小木虫查看更多
今日热帖
京公网安备 11010802022153号
建议先做做毕赤酵母胞内表达。
你这个蛋白本身是属于哪一种蛋白，像胞内蛋白（但不是囊体和核内的蛋白、胞外蛋白）用酵母做胞外表达是很有难度的，因为折叠环境不一样很容易胞内淤积或形成非可溶性蛋白。
我也是跟你一样的问题 gs115 x33 载体ppiczaA 特征与你一直 蛋白带与酶活都是自欺欺人式表征。。。同求解决办法
问题解决了吗？我也有同样的问题
，