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求助大神们,PCR引物C端如何加蛋白标签flag? - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 互动社区
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求助大神们,PCR引物C端如何加蛋白标签flag?

作者 清若123456
来源: 小木虫 750 15 举报帖子
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急急急,求大神们救救急(。。。。。。。。。。。。。。。。凑字数。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及删了,怎么这个还提示
对不起,您已经发过类似内容的主题了,请不要一帖多发哦发不了)

老师让我在引物(PCR引物)序列中引入蛋白标签flag,方便后续的纯化。我的蛋白是分泌蛋白,我查到分泌蛋白一般建议把标签插在C端,求问大神们,我这样设计对不对?

上游引物F :CCC(保护碱基)+ AAGCTT (酶切位点)+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG(标签序列)

下游引物R:GC(保护碱基)+ GTCGAC(酶切位点) +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC(flag标签序列反向互补)

我之前查的有人说说标签蛋白只需要加在上游引物就行,下游不用加?但那样两个的TM值不就差距很大了吗? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • snoopyzxx

    你这个,搞错了。

  • snoopyzxx

    你要加在 C端,当然是只用在反向引物中加了啊。你设计的这个,到时候两段都有标签。

  • goblin7

    首先,那个应该是tag标签吧

  • goblin7

    其次

  • goblin7

    其次,这样p的话出来的产物3端和5端都有tag哦

  • goblin7

    TM值我也走想过之前,一方面其实相差不会太大,他相比于你的目的基因影响不大的,另一方面,你实在担心就在保护碱基上调整一下

  • 清若123456

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-02 18:52:15
    你要加在 C端,当然是只用在反向引物中加了啊。你设计的这个,到时候两段都有标签。

    噢噢,大神你的意思是N端加标签就加在上游引物,C端标签加在下游引物对吧?
    我之前看到N端加的蛋白标签在引物序列之前,那我这个C端的蛋白标签在引物后面还是前面啊?是下面这样吗?(新手,问题比较小白,大神您多担待)
    上游引物F :CG(保护碱基)+ AAGCTT (酶切位点)+ KOZAK序列 +引物序列
    下游引物R:CG(保护碱基)+ GTCGAC(酶切位点) +引物序列 +蛋白标签序列

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