反相纯化方法对于大部分合成人员来说并不陌生，通常当样品极性太大、正相制备保留太强、极性结构相近时都可尝试反相纯化方案。但是反相制备后溶剂中通常会含有大量的水，所以对于反相纯化的后处理，实验人员往往觉得比较麻烦。今天就跟大家聊一聊常用的五种反相纯化后的样品后处理方法。

1、旋蒸
旋转蒸发可以用来回收、蒸发有机溶剂，通常做法是在减压条件下连续蒸馏易挥发性溶剂，应用于化学、化工、生物医药等领域。

但是如果样品在高温下不稳定或者对温度敏感，需常温或低温保存就不能用旋蒸这种方法。


2、冷冻干燥
真空冷冻干燥技术是将含水物料冷冻成固体，在低温低压条件下利用水的升华性能使物料低温脱水而达到干燥的新型干燥手段。由于真空冷冻干燥技术在低温、低氧环境下进行，大多数生物反应停滞且处理过程无液态水存在，水分以固体状态直接升华，使物料原有结构和形状得到最大程度保护，最终获得外观和内在品质兼备的优质干燥制品。

对于稳定性较低，水溶性较强的产品，可以利用真空冷冻干燥法除水。但是必须先除去水相中的缓冲盐，常用于蛋白质类产品。冷冻干燥不会使热敏性的物质发生变性或失活，所以一般对温度敏感的样品可以采用冷冻干燥技术，且冷冻干燥除水比较彻底，一般可直接拿到成品产物。但是冷冻干燥费用较高耗时较长，样品量较大时一般不会采用。

3、调节pH值
当样品中含有某些酸性基团（如羧酸、磺酸等）时，在碱性状态下会成盐，调pH至酸性成游离状态后可萃取或析出沉淀过滤出成品。当样品中含有某些碱性基团（如氨基等）时，酸性状态下成盐，再调pH至碱性成游离状态萃取或析出沉淀过滤出成品。如样品结构中不含特殊的酸碱基团就不太适合用调节pH值的方法来后处理。

4、萃取
萃取是利用物质在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度不同，使溶质从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中的方法。反相制备后的水溶液，可以加入与水不互溶，且对产品具有一定的溶解度的有机溶剂，对水相进行连续萃取，直至将目标物从水层提取到有机层。另外，将无机盐溶在水中，更容易将产品萃取至有机相，即所谓的盐析法。当样品溶解度在不同溶剂中有较大差异时可以采用萃取方法。


5、填料吸附除水
填料吸附除水是用反相Flash柱先将制备后的粗品中大部分的水除掉，方便后面旋蒸除掉有机相。具体操作如下：

①制备后的样品里面有大量的水，在保证样品不析出的前提下可以先将有机溶剂旋蒸除去，或者在未处理的样品中直接加入2-3倍的纯水稀释有机溶剂。

②将SepaFlash AQ C18柱用纯水润柱。
③将A管路放进处理后的样品瓶里，软件系统设置A相：100%，将样品抽进反相柱中，同时用软件监测UV吸收图谱以防样品流出色谱柱。

④样品全部抽完后，用B相100%的甲醇或乙腈将样品冲出反相柱，这样处理后的样品里面含有最多一个柱体积的纯水。

⑤用旋蒸将有机相蒸发去除后拿到成品。
填料吸附除水可以快速的将样品中大部分的水除掉，方便后续旋蒸，节省时间，操作简单，但是对于在反相柱中保留较弱、纯水就可以洗脱的大极性样品不能采用这种除水方法。


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