大肠杆菌发酵的问题
各位老师同学们好,我现在实验遇到了些麻烦。就是使用大肠杆菌BL21在25℃发酵表达一种蛋白酶(长时间发酵,要发酵液中的酶),发酵70h后发现发酵液中总是出现跟毛线团一样的聚集物,好像什么东西没溶解。重新转化感受态之后再表达依然是这种情况。但是转化其他表达载体后发酵就没有这样的现象。应该可以排除是培养基的问题和菌被污染问题,这个聚集物是酶的包涵体吗还是什么。另:测的酶活也很低,请老师不吝解答。
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各位老师同学们好,我现在实验遇到了些麻烦。就是使用大肠杆菌BL21在25℃发酵表达一种蛋白酶(长时间发酵,要发酵液中的酶),发酵70h后发现发酵液中总是出现跟毛线团一样的聚集物,好像什么东西没溶解。重新转化感受态之后再表达依然是这种情况。但是转化其他表达载体后发酵就没有这样的现象。应该可以排除是培养基的问题和菌被污染问题,这个聚集物是酶的包涵体吗还是什么。另:测的酶活也很低,请老师不吝解答。
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是分泌的出来的酶,还是胞内重组表达
建议重新转化重组菌株
周期过长,蛋白部分变性,会有絮状沉淀析出。建议改变发酵工艺,摸索最佳工艺,