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求助!做糖基化蛋白样品制备时,为什么一般文献中都要进行透析才能完成样品制备?

作者 阿豆y
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请问透析原因和透析袋规格选择依据分别是什么?小白急求

比如这篇文献中没提到透析原因及规格选择

求助!做糖基化蛋白样品制备时,为什么一般文献中都要进行透析才能完成样品制备?
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  • 精华评论
  • zinfly

    透析就是为了除盐和小分子,因为反应溶剂都是PBS,或者添加的其他小分子化合物,
    一般情况都是根据原料和产物的分子量,不同的透析膜对应的分子量范围不同。

  • 阿豆y

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by zinfly at 2020-05-11 10:33:25
    透析就是为了除盐和小分子,因为反应溶剂都是PBS,或者添加的其他小分子化合物,
    一般情况都是根据原料和产物的分子量,不同的透析膜对应的分子量范围不同。

    那您能给我详细解答下吗?
    1.我发的图片里PPI(50-70KD),阿拉伯胶(240-580KD),这里糖比蛋白的分子量还大,他透析是为了除去什么?
    2.如果是盐的话,缓冲溶液会对后续什么测量有影响?
    3.还是为了除去未反应的糖或蛋白,那是不是就要按照ppi的分子量选择透析膜?

  • 阿豆y

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by zinfly at 2020-05-11 10:33:25
    透析就是为了除盐和小分子,因为反应溶剂都是PBS,或者添加的其他小分子化合物,
    一般情况都是根据原料和产物的分子量,不同的透析膜对应的分子量范围不同。

    那您能给我详细解答下吗?
    1.我发的图片里PPI(50-70KD),阿拉伯胶(240-580KD),这里糖比蛋白的分子量还大,他透析是为了除去什么?
    2.如果是盐的话,缓冲溶液会对后续什么测量有影响?
    3.还是为了除去未反应的糖或蛋白,那是不是就要按照ppi的分子量选择透析膜?

  • zinfly

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 阿豆y at 2020-05-11 10:47:03
    那您能给我详细解答下吗?
    1.我发的图片里PPI(50-70KD),阿拉伯胶(240-580KD),这里糖比蛋白的分子量还大,他透析是为了除去什么?
    2.如果是盐的话,缓冲溶液会对后续什么测量有影响?
    3.还是为了除去未反应 ...

    透析你要看清楚膜的规格,尤其是分子量范围,你这里没提供。
    1.你这个阿拉伯胶是多糖,但是你有用到葡萄糖,糖苷,那些多糖在加热条件下,还有可能降解损失,掉下来的小分子,都可以通过透析去除。
    这两个的复合物,分子量,怎么也要1000kd,或者用1500的,这样的话,就能把未反应的ppi和阿拉伯胶去除,
    2.后续测量几乎都用不到盐,除非是直接用LC测分子量,可以观察一下,因为你要表征结构,需要纯品,需要定量,这个盐不挥发,无法冻干去除。
    3.透析一般情况都是分步骤的,先去除小分子,这个最容易去除,这个透析膜要看原料的分子量和目标化合物分子量,综合考虑

  • 阿豆y

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by zinfly at 2020-05-12 09:54:16
    透析你要看清楚膜的规格,尤其是分子量范围,你这里没提供。
    1.你这个阿拉伯胶是多糖,但是你有用到葡萄糖,糖苷,那些多糖在加热条件下,还有可能降解损失,掉下来的小分子,都可以通过透析去除。
    这两个的复合 ...

    1000kd,或者用1500的会不会太大了?不是说选择透析袋为目标分子量的一半比较好,PPI(50-70KD),阿拉伯胶(240-580KD)的话,选100k?

  • zinfly

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by 阿豆y at 2020-05-13 15:11:56
    1000kd,或者用1500的会不会太大了?不是说选择透析袋为目标分子量的一半比较好,PPI(50-70KD),阿拉伯胶(240-580KD)的话,选100k?...

    你可能搞混了,你要分离纯化的目标应该是复合物把,不然你也没必要做这个实验了,
    因此你要先用GPC或者LC等测量目标化合物分子量大概多少,然后再去选配。
    你这两个化合物,即使是二聚都有70+580,如果是寡聚,多聚,应该不止这些把,

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