求助:纤维素酶活测定的问题
本人利用实验室从酱香大曲中筛选的5株耐高温放线菌测定纤维素酶活,所用培养基:CMC-Na 10g,(NH4)2SO4 4g,Na2HPO4·12H2O4.2g, KH2PO41.4g, FeSO4·7H2O 0.016g,MgSO4·7H2O 0.5g,蛋白胨3g,酵母浸出物0.162g,蒸馏水1000ml。从斜面上直接挑取少量菌种接种至100ML液体培养基中,在50℃,180r/min条件下,振荡培养3d,经观察,三角瓶中培养基均有大量菌丝体产生,且有两瓶已经浑浊,直接吸取1ml培养液,50℃水浴活化5min后加入4ml0.625%CMC-Na溶液(用PH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液配制,提前也在50℃水浴活化过)在50℃水浴1小时后,立即加入1ml2mol/LNaOH溶液和2mlDNS溶液,在沸水浴中处理5min后用冷水冷却后未变色,与空白样的颜色一致,测不出酶活。反复多次都是不可以。不知道是什么问题?求助。困惑的是观察以CMC-Na为唯一碳源培养后菌株是生产的,而且长的还不错,但是就测不出酶活。有高人能帮忙吗? 返回小木虫查看更多
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酵母浸出物,蛋白胨都是含碳的吧,可以测一下培养液中纤维素是否被放线菌所利用?
还有没有可能反应很慢,时间不够,处理时间更长一些?
可能是你的酶活性太低了
买点商品纤维素酶做个阳性对照,这样就找到问题所在了
纤维素酶活测定方法国家有标准,如果按照那个方法测定与对照没有相差的话,你的菌种可能就不产纤维素酶。如果知道菌种产纤维素酶,而在你做的时候不产酶,那就是你哪里做错了。一般纤维素酶需要培养5天左右才会出现产酶峰值。
是不是我选择的底物有问题呢?我所选择的就是普通分析纯的羧甲基纤维素钠,粘度为300-600
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请问楼主解决了吗?我也碰到了一样的问题!
底物一般没有大问题,不同的羧甲基纤维素钠对于测酶活大小有区别,测酶活有无区别不大。。。
现在测出来了吗?什么原因呢?我也碰上了这个问题