CRISPR/Cas9的问题
请求各位大佬给小弟解答，最近在大肠杆菌(BL21（DE3）)中做Cas9，每次电转第一个Cas9质粒很正常，但是电转第二个含有sgRNA的Target质粒后涂板总是不长，请问各位大佬这是什么原因。
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你能在bl21中转进去？
菌的基因编辑，一般转染crispr/Cas9系统的同时，还需要加入修复模版的，有没有先将修复模版转入菌里面呢？或者可以考虑共转化；大肠杆菌的基因编辑的话，这块比较简单，如果不是非常必要的话，一般送出去公司构建就可以了
貌似BL21比K12什么的要难。。。看了些文献 说BL21修饰的比较多 也不知道是真是假
，
你的Bl21基因敲除做出来了没，可以给点经验吗