安捷伦1260高效液相色谱梯度洗脱条件设置
1. 40min时的流量和最大压力没有填写，梯度是不是就不能按照预设跑了？
2. 这个梯度洗脱的条件是按照文献（0-25min）条件自己改的（25-40min），不止这么思考是否正确，麻烦大神帮忙看看：文献0-15分钟是为了平衡柱子，15-25min是为了洗脱流出样品；文献后续就没有下文了，我看了书上面说梯度洗脱之后要进行柱再生和平衡啥的玩意儿，然后我就在25-30min用纯甲醇冲洗保证所有物质都能洗脱出来，30-40min再梯度过渡回起始流动相条件。我的疑问是：梯度洗脱后重生和平衡的必要性和重要性？原先文献0-15min平衡是否可以移到上一针的末尾设置上条件进行？40min一针是不是有点长？A 磷酸缓冲，B甲醇 @学术巨星
设置错了梯度.jpg
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京公网安备 11010802022153号
一般是先用初始流动相梯度平衡柱子（监测压力变化），再梯度洗脱，洗完后柱子保存在一定溶剂中（一般是甲醇，看条件）
运行序列时候，每一针开始都应该始于初始流动相，再梯度洗脱，然后再纯甲醇重生，终于初始流动相平衡
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建议多看看色谱书籍！！！！！
你这个就是在15分钟的时候进样，25-30是为了洗脱物质和和平衡。30-40分钟是为了平衡和回到初始进样状态为了再进样。然后你你又需要等15分钟才能进样。 简单的东西被你 搞的好复杂，而且时间好长。
开机时平衡色谱柱让仪器运行，是为了得到一个良好的基线（仅有流动相通过时仪器检测显示响应值曲线）
样品检测结束后冲柱子，通过高含水量的有机溶剂（90%水：10%甲醇）洗脱掉存在于色谱柱（反向色谱）中缓冲盐、酸、碱等物质。最后使用100%的有机溶剂冲洗柱子（15-20倍柱体积），是为了延长色谱柱的使用寿命