最近在做race 用的smart的takara试剂盒,很难扩出目的条带。现在有个疑问就是我的引物确信无问题(测序和转录组测序匹配过,但tm值不高 大多只有50-67的样子)两轮巢式下来引物匹配的情况下总能扩出东西吧,但总是涂抹 要不就是条带多且弱。实验室也有用tm值不高的引物扩出条带的,但我就不行 都快好怀疑人生了 返回小木虫查看更多
路过,顶起来
先看下rna质量如何,rna完整度低,race效果肯定不好,rna的rin值尽量高一点,大于7。另外,race的5端接头引物smarter是dna和rna杂合链,应该保存在-80,避免反复融冻,如果街头降解,f街头接不上,pcr肯定没东西。然后,race产物稀释5-10做pcr,最好和内参一起扩增,做比较。 ,
路过,顶起来
先看下rna质量如何,rna完整度低,race效果肯定不好,rna的rin值尽量高一点,大于7。另外,race的5端接头引物smarter是dna和rna杂合链,应该保存在-80,避免反复融冻,如果街头降解,f街头接不上,pcr肯定没东西。然后,race产物稀释5-10做pcr,最好和内参一起扩增,做比较。
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