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质粒是否需要酶切？

请教大家一个问题，我要转质粒到细菌里面进行同源重组做基因敲除，是不是一定要做酶切？酶切之后如何判断酶切彻底了呢？可以取一点跑胶，如果OK的话直接把剩下的用柱子纯化后转化吗？谢谢

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mingming8231

酶切之后重组效率会大大提高。酶切产物用PCR产物纯化试剂盒纯化就可以了。
小冀-

如果是做敲除的话，带有同源片段的质粒最好酶切，环状质粒导入后会造成假阳性，不利于后续筛菌的~酶切的话一般选择一下酶切位点，跑胶的时候条带容易区分就行，之后就是跑胶回收、转化了
小冀-

引用回帖:
5楼: Originally posted by 实验室小白 at 2018-09-26 12:28:02
可以直接酶切液纯化吗？因为只有纯化液体的试剂盒，不想切胶，不知这样纯化出来的质粒可不可以保证酶切完全？
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理论上是可以的，不过酶切液直接纯化之后的成分会有点多，可能会影响转化吧
小冀-

引用回帖:
7楼: Originally posted by 实验室小白 at 2018-09-30 14:47:44
这是我今天试切了一下的跑胶图，23道是切过的，45没切过，23这算是切彻底了吗？我可以用剩下的酶切产物直接转染吗？问题有点多，如能回答，不胜感激！

...

说实话，你这个胶跑的很不好，虽然切不切条带不一样，但是估计还是分不开，酶切液里面成分太多，你还是用你们的试剂盒回收一下吧，如果实在不想做切胶回收，切完回收之后要立即做转化，防止切开的片段又连上
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