目前在构建启动子的载体,用的是pBI121, 载体构建成功后转入农杆菌(GV3101、EHA105)之后,用菌落PCR验证,要么是二聚体,要么没有条带,请问有人知道是怎么个情况吗? 返回小木虫查看更多
做对照了吗?对照条带怎么样
可以用转入农杆菌的质粒做模板,p一下
做菌液PCR试试,拿几个1.5ml或者2ml的管子装500ul含有抗性的培养液挑入几个菌落过夜培养,取100ul放入新的管子,离心弃上清加入等体积的灭菌水混匀,80°金属浴10分钟后再做PCR检测,前体是你要确定你的载体构建成功了。你可以用构建好的载体质粒为模板做阳性对照,水为模板做阴性对照。
再提农杆菌的质粒再p,或者提高退火温度
你的载体确定成功了吗?农杆菌确定转成功了吗?
做对照了吗?对照条带怎么样
没有对照,用什么做对照
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可以用转入农杆菌的质粒做模板,p一下
做菌液PCR试试,拿几个1.5ml或者2ml的管子装500ul含有抗性的培养液挑入几个菌落过夜培养,取100ul放入新的管子,离心弃上清加入等体积的灭菌水混匀,80°金属浴10分钟后再做PCR检测,前体是你要确定你的载体构建成功了。你可以用构建好的载体质粒为模板做阳性对照,水为模板做阴性对照。
再提农杆菌的质粒再p,或者提高退火温度
你的载体确定成功了吗?农杆菌确定转成功了吗?