恳请前辈们指点迷津
小弟最近克隆几个基因(几乎都是2000bp左右)总是有条带弥散的状况。图一是各取1.5微反转录产物、跑30的循环,但是只跑出两个比较亮的。于是把剩下4个基因中的前两个取2微模版后两个1.5微模版,都跑40个循环,结果如图二所示,一片弥散。还一个问题是将图一中那两个亮度亮的胶回收后,连接pUCM-T、转化、涂板后长菌但是菌落pcr跑不出条带,恳请前辈们指点迷津
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小弟最近克隆几个基因(几乎都是2000bp左右)总是有条带弥散的状况。图一是各取1.5微反转录产物、跑30的循环,但是只跑出两个比较亮的。于是把剩下4个基因中的前两个取2微模版后两个1.5微模版,都跑40个循环,结果如图二所示,一片弥散。还一个问题是将图一中那两个亮度亮的胶回收后,连接pUCM-T、转化、涂板后长菌但是菌落pcr跑不出条带,恳请前辈们指点迷津
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