原核表达蛋白表达量很低，求大神指点！
最近在表达一个蛋白，质粒是直接购买文献中构建好的，如下图所示。
感受态也是用的文献中的Rosetta™ 2(DE3)pLysS，所用的诱导条件也是跟文献保持一致，18℃下IPTG终浓度为0.5mM，诱导16小时，可溶性表达。
然后8000g 4℃离心5 min，弃上清，以20mM Tris-HCl(pH=8.0)重悬沉淀，加入PMSF终浓度为100μg/ml，200W超声1s，停2s，共15 min，然后SDS-PAGE电泳。
但是经过SDS-PAGE电泳检测，蛋白表达量很低，重复好多次了，一直也没办法调整过来，以前做流调出身的新手，现在转行做蛋白，一直做不出来，老板和我都很着急，求大神支招。
其实，我也知道肯定有某些方面我做的跟文献里面不一致，但是我又不知道具体问题出在哪里，很是惆怅啊……
我也怀疑是不是超声破碎的时候蛋白裂解了，但是也不知道如何证实，也不知道如何解决……
就这么多金币，帮我解决了这个问题都送出去算了……
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京公网安备 11010802022153号
楼主，表达分子量大于100kda的重组蛋白，经常会遇到表达量不高的问题。我想这个应该没有更好的解决办法，楼主不如加大发酵规模，然后采用亲和层析加分子筛或离子交换色谱来提纯，后两者我也没有做过哈。
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Rosetta™ 2(DE3)pLysS的生长温度略低于DE3，33℃左右，用乳糖诱导的效果比IPTG好多了，很多DE3表达很多的酶，plysS几乎没表达的几率还是蛮大的。重点：乳糖诱导
诱导的od是多少
楼主，我是做细菌的，最近也要纯化这个蛋白，楼主可否可以借点这个质粒给我？万分感谢