pcr结果不稳定
本人最近在用pcr筛选特定基因阳性株，用到的是大肠杆菌，煮沸法提取的DNA。第一次P出了很多阳性，后面针对这些阳性株再进行同样的pcr，就再也P不出来条带了，而且阳性株经常P不出条带，我想知道是哪个环节错了，是DNA提取的问题吗？我的操作…我始终觉得不可能会有这么大的失误，有没有哪位大神知道，指导指导哇
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有时候可能是煮沸法的问题 菌的浓度太高反而煮沸不好裂解出DNA 可以试下其他方法提DNA然后再PCR呢？
使用NaOH 20mM来煮沸裂解。或者选一个专用于菌P的mix吧。
我想到一个别的可能性，你的目的基因是在质粒上的，传代培养后，质粒丢失导致后面阴性了
，
跑个胶看看还有没有DNA了……