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大肠杆菌SEM制样

最近一直在用SEM拍大肠杆菌的形态，先用戊二醛的PBS溶液固定，在用乙醇脱水，冷冻干燥，喷金。最后拍出来的细菌表面塌陷，不光滑饱满。重复多次都是这样的情况，不知道是什么原因导致的。希望有经验的高手能够帮助我解决这一问题，在下感激不尽。

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haifeng918

考虑以下几个方面：1.戊二醛的浓度有可能过高，过高容易塌陷，过低容易固定不好；2.在固定之后，脱水之前要用蒸馏水冲洗干净残留的戊二醛；3.在酒精梯度脱水之后，用叔丁醇置换酒精三次。大肠杆菌外壳较硬，还是比较好制样的。
hzh1258

引用回帖:
3楼: Originally posted by King-白砂糖 at 2018-05-27 09:07:44
感谢感谢，我再试试。
...

楼主，现在效果怎么样？我也想用sem去观察一下大肠杆菌
snoopytbw

引用回帖:
5楼: Originally posted by King-白砂糖 at 2018-06-14 08:46:10
还没测。刚把样品做出来，这两天去测看看效果。。
...

别用乙醇脱水，你试试自然风干吧，乙醇脱水就会塌陷，以前有高人教我用乙酸乙酯，你也可以试一试呀。我固定24小时后，洗涤完全，就风干上机的，非常棒
，
snoopytbw

引用回帖:
7楼: Originally posted by King-白砂糖 at 2018-06-14 15:21:48
请问你是放在什么东西上风干的？硅片还是玻璃容器里？
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我就放在超净台里面风干的