镍离子与咪唑环结合
镍离子能够与目的蛋白组氨酸中咪唑环结合，提高流动相中咪唑浓度，其会将目的蛋白替换洗脱。
但是与镍离子结合的高浓度咪唑怎么洗下来，用不含咪唑的流动相能洗下来么，如果洗下来，镍离子是什么状态，未和其他物质结合？如果没洗下来，下一针目的蛋白怎么会与镍离子结合。（浓度密度大的咪唑环会替换比其弱的咪唑，从而将目的蛋白洗脱）
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正常水冲洗就可以了，实在不行就用100毫摩尔的EDTA直接把镍干掉，然后重新挂镍
额，和镍结合的咪唑用水洗不下来，下一次用时候HIS把其置换下来，竞争结合，然后洗脱是高浓度的咪唑置换蛋白，高浓度的咪唑和镍结合，并不是所有咪唑结合，只是环境中咪唑浓度高，然后亲和力比和蛋白结合时高，蛋白置换咪唑时，环境咪唑浓度低或者没有，蛋白此时和镍的亲和力高，