关于大肠杆菌噬菌体扩培的问题
学霸们好，我最近在做产肠毒素大肠杆菌的分离纯化，现在通过双层琼脂的方法纯化分离到的大肠杆菌噬菌体，通过抠噬菌斑琼脂块的方法制备噬菌体悬液，但是悬液只有6-7次的数量级，打算提高噬菌体裂解液的滴度，在把噬菌体悬液接种到对数期的大肠杆菌悬液中，摇床五六个小时后并没有达到裂解澄清，我以为是接种量不足，过夜后反而更浑浊了，之前按1mmol/L的量添加过氯化钙，也是一样的情况，但是用悬液进行双层琼脂倾注能得到明显的噬菌斑，请问这是遇到了什么问题，我该怎么解决呢？
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Phage resistance
大肠君含有抵抗噬菌体的个体，连续传代或培养时间过长会屎抵抗噬菌体的菌扩增，类似于选择培养基的原理。你的问题可能是MOI过低，先抠个斑，小体积，比如说5毫升，接种处于对数生长早期的菌3到4个小时在培养液清澈的时候收毒，离心过滤保存，得到高滴度毒种再进一步放大。
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您好，我能问一下您做的有明显噬菌斑的那张图噬菌体原液和大肠杆菌菌悬液的稀释倍数吗？我现在做只是在验证的时候能看到噬菌斑，用双层平板法却得不到单个的噬菌斑。而且我用0.22μm虑膜过滤除菌总是除不干净，能问一下您用的是什么虑头吗？万分感谢