刚接触液相色谱，照搬了文献上梯度分离方法做5种标准样品，结果是完全不能分开出了一个长达7分钟的大峰。用该梯度方法做单个标样，标样都在8.9分钟左右出峰，出峰时间非常接近。想改进这个梯度方法把5种标样完全分离，可是不会改。求高手指导一下怎样改梯度分离方法呀？
原方法  流速0.2ml/min   柱温40度
   时间        流动相甲醇（含0.2%甲酸）的比例      流动相水（含0.2%甲酸）的比例
0.01                            25
5                                 40
20                              80
22                               80
22.01                            25
30                                25

文献上色谱柱是shim-pack VP-ODS  （2mm*250mm  i.d.5微米） ，
我实验室只有C18反相柱子（4.6mmi.d.，150mm色谱柱长度，5UM色谱填料粒径）我照搬文献上原方法，结果分离效果非常不理想，如何改进原方法 返回小木虫查看更多