重组质粒pYES2转化酵母H1246,挑取单菌落进行pcr,没有目的条带
制作酿酒酵母H1246感受态,用醋酸锂法转化重组质粒pYES2后,用尿嘧啶缺陷型的SC培养基加2%葡萄糖筛选,30度培养48小时后,长出白色单菌落,挑取单菌落到10微升无菌水中,98度加热10分钟,取2微升进行pcr,跑胶发现点样孔很亮,但没有目的条带,查了查说是蛋白挂孔,p了两次都没有目的条带,会是假阳性吗?因为是第一次做,很多东西都不懂,请各位大神帮帮忙
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制作酿酒酵母H1246感受态,用醋酸锂法转化重组质粒pYES2后,用尿嘧啶缺陷型的SC培养基加2%葡萄糖筛选,30度培养48小时后,长出白色单菌落,挑取单菌落到10微升无菌水中,98度加热10分钟,取2微升进行pcr,跑胶发现点样孔很亮,但没有目的条带,查了查说是蛋白挂孔,p了两次都没有目的条带,会是假阳性吗?因为是第一次做,很多东西都不懂,请各位大神帮帮忙
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想请教一下构建酵母真核表达的质粒直接连蛋白的cds序列行不行啊?还是要加酵母的序列?
您好,我正在做醋酸锂转化酵母,第一次做不太懂,想请教您一下,转化涂板后一直不长菌落,是什么原因呢?PYES2质粒转化前需要限性化吗?
加抗生素了没有,尝试用通用引物,高保真酶试下,直接菌夜PCR是没问题的
可以请教下楼主感受态细胞是如何制备的吗?我现在也在转pYES2质粒可是转了几次平板上都没有转化子出现
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请问下 筛选能用2%的棉子糖- U来筛选吗