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重组质粒pYES2转化酵母H1246,挑取单菌落进行pcr,没有目的条带

作者 感觉要延期哎
来源: 小木虫 650 13 举报帖子
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制作酿酒酵母H1246感受态,用醋酸锂法转化重组质粒pYES2后,用尿嘧啶缺陷型的SC培养基加2%葡萄糖筛选,30度培养48小时后,长出白色单菌落,挑取单菌落到10微升无菌水中,98度加热10分钟,取2微升进行pcr,跑胶发现点样孔很亮,但没有目的条带,查了查说是蛋白挂孔,p了两次都没有目的条带,会是假阳性吗?因为是第一次做,很多东西都不懂,请各位大神帮帮忙

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  • 精华评论
  • panda的熊

    想请教一下构建酵母真核表达的质粒直接连蛋白的cds序列行不行啊?还是要加酵母的序列?

  • 小花猫01

    您好,我正在做醋酸锂转化酵母,第一次做不太懂,想请教您一下,转化涂板后一直不长菌落,是什么原因呢?PYES2质粒转化前需要限性化吗?

  • lianxp

    加抗生素了没有,尝试用通用引物,高保真酶试下,直接菌夜PCR是没问题的

  • 飞不动D鸟

    引用回帖:
    10楼: Originally posted by 感觉要延期哎 at 2018-07-18 09:56:39
    跟酵母表达载体连接一般是两端保护碱基,两端酶切位点,中间cds
    ...

    可以请教下楼主感受态细胞是如何制备的吗?我现在也在转pYES2质粒可是转了几次平板上都没有转化子出现

  • 喵喵咪lalla

    请问下 筛选能用2%的棉子糖- U来筛选吗

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