关于蛋白洗涤过程中出现变性的问题
最近,利用大肠杆菌系统表达了一个50多KDa的蛋白,通过对超声后的上清和沉淀分别进行电泳发现,目标蛋白绝大多数都在沉淀中,怀疑是包涵体形式表达,可是利用实验室常用的包涵体清洗液ph9.5(氯化钠,edta,tris,triton x-100,尿素)对沉淀进行洗涤离心后,溶液中大部分沉淀结成硬块,极少部分可以溶解,有少量蛋白存在,这样看是蛋白在洗涤过程中变性了,可是变性的原因不清楚,请大神提点下。
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最近,利用大肠杆菌系统表达了一个50多KDa的蛋白,通过对超声后的上清和沉淀分别进行电泳发现,目标蛋白绝大多数都在沉淀中,怀疑是包涵体形式表达,可是利用实验室常用的包涵体清洗液ph9.5(氯化钠,edta,tris,triton x-100,尿素)对沉淀进行洗涤离心后,溶液中大部分沉淀结成硬块,极少部分可以溶解,有少量蛋白存在,这样看是蛋白在洗涤过程中变性了,可是变性的原因不清楚,请大神提点下。
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