【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮,SDS-PAGE结果差异显著,这是为何?
我从一株细菌中筛选蛋白酶,发酵液测出了不错的蛋白酶活,但是发酵液超滤浓缩以后,样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带,不加热直接上样,SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带,这是为何?
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀,重溶,透析,再跑SDS-PAGE,煮过的样品弥散,几乎没有主带,不煮的样品有多条带,这是为何?
请虫友们指教。
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我从一株细菌中筛选蛋白酶,发酵液测出了不错的蛋白酶活,但是发酵液超滤浓缩以后,样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带,不加热直接上样,SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带,这是为何?
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀,重溶,透析,再跑SDS-PAGE,煮过的样品弥散,几乎没有主带,不煮的样品有多条带,这是为何?
请虫友们指教。
是不是加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开啊,长链断裂呈短的多肽链
不懂,学习一下……
加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开
不懂,帮顶
加热煮的话,一般是破坏蛋白的空间结构,蛋白都是线性的,按照蛋白的分子量大小不同来分离,而没有煮的话,蛋白的空间结构依然完好,所以跑得快慢就不止和分子量有关了,还和它的空间结构有关,所以SDS-PAGE电泳结果差异显著也就不足为奇了,
加热煮的话,蛋白质的空间结够被破坏了,就是变性,属于不可能复性的变性,如果煮的时间长,就可能导致蛋白质的一级结构破坏,形成分子量不同的蛋白,甚至多肽,就是出现了你说的很多条带。
加热煮沸就是为了破坏蛋白质的高级结构.煮过的蛋白跑胶就不会受到它本身高级结构的影响,只和大小相关.不煮的话,跑胶的速率就与很多其他因素相关,特别是高级结构.