涂布法菌落计数问题
大咖们，小弟在用涂布法对绿脓杆菌（铜绿假单胞菌）进行计数，培养基是TSA，37度培养箱近24h培养。得到的结果照片如下：
请教几个问题：
1. 为什么OD值相差两倍的菌悬浊液，对应同样的连续稀释倍数（10^5, 10^6, 10^7, 10^8）,得到的菌落差异巨大？
2. 为什么有的菌落很清晰，而有的却连成一片，无法区分？什么因素影响的？（被污染了，还是时间过长，或者绿脓杆菌是好氧菌，我用parafilm封住平板导致的？）
3. 我得到的OD值与CFU关系，不是很好。而且与文献相差两个数量级。（OD=1.0时，我得到是2.8*10^6，文献中为2.04*10^8，但是同样为铜绿假单胞菌，可能具体的种不太一样。）
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京公网安备 11010802022153号
我上个星期也做了平板涂布菌落计数，效果也不是很理想。原因可能是天气的原因，还有个就是在作剃度稀释的时候没有用移液枪吹吸充分混匀，所以最后的结果悬殊
换枪头，充分混合，震荡，都是容易忽视的细节
我觉得从超净台里面拿出来斡旋影响不大
从平板来看，涂布的不够均匀
有可能是板子太湿了，导致涂板子的时候没涂均匀
菌落数在50到200间有效，只长几个菌落的无效
涂布出来的板子，相邻之前基本符合10倍关系。差距太大，需要考虑1.进行梯度稀释时没有摇匀上一个浓度，就加入下一个梯度瓶中。2.正规操作中，每涂布一个板子，涂布棒都应该灼烧完全，避免影响下一个涂布的板子。所以，有可能是，涂布棒没有冷却的时候涂布，把菌烧死了。这个可以多找几个涂布棒轮流用，也可以在没加菌液的培养基上来回涂布，把热量传出去。连在一偏的菌落，是因为浓度过大，分不开，需要稀释。
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