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大气颗粒物真菌DNA提取问题，试剂盒还是手提

请问有没有前辈们知道提取大气中的DNA什么方法提取的更多？我们打算研究大气中真菌的种群分布特征，想用高通量测序的方法，可是DNA提取成了一个难点，我提取的面积得有100多平方厘米了，采的又是TSP，可是用MPMobio 试剂盒提取的浓度还不到10ng/μl。求指教!感激不尽！

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snoopytbw

本来DNA含量就很低，而且很多都是碎片呀
yubeihong

采集方法不对吧
lm880729

可以试试天津兰瑞的微量基因组提取试剂盒，之前我们提取尿液中的真菌细菌DNA，用pcr方法检测感染的。菌体含量很低，提取效果还可以。说明书上写的最低提取限度是4cfu/ml。你也可以试试。
snoopytbw

引用回帖:
3楼: Originally posted by thug at 2017-12-24 18:32:33
请问您提取过吗？我问过测序公司，他们说最低含量要大于10才能做PCR的，我看文献中他们提取的也都大于10，不知道问题出在了哪里
...

测序公司用的是通用16s的多重引物组，其实10以下完全可以做了，你让他们风险扩增吧。平时的qPCR那个样品要求要10ng的哦。有很多都做不到，如果扩一次不够，可以要求扩2次的，后续的分析都一样
，
snoopytbw

引用回帖:
5楼: Originally posted by thug at 2017-12-24 20:51:20
我用的是大流量采样器，用的石英滤膜采的TSP，48小时，请问您提过DNA吗？能否指教一下呢
...

你换个膜试试，其实中流的就够用了。完全可以做的。DNA提取一点难度没有啊，应该不是什么问题，你买土壤微生物提取试剂盒试试，罗氏的，目前国际上最好的一款了。就是有点复杂