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复苏培养杂交瘤细胞失败！！！

作者 why0393: 来源: 小木虫 300 6 举报帖子

有没有做单抗的虫子？本实验室年前保存在液氮的的杂交瘤细胞现在怎么复苏都无法存活超过两天！细胞在瓶子里就是不长，而是慢慢的萎缩死亡。这是怎么回事？
PS：在保存的时候才发现保存用的血清是污染的血清。对复苏后的细胞离心清洗两次，外加双抗仍然无法存活。求高手指点返回小木虫查看更多

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yongliqin

你可以尝试一下在96孔板中复苏一下，待细胞长起来后在转回到瓶中，可能你本身活的细胞就不是很多，直接在瓶中复苏的话不容易活。
love2412

刚复苏时的活性、密度是多少？要保证活细胞的密度。活性实在太低的话试下梯度离心分离活细胞，或者像2L说的那样用微孔板（还可以加滋养细胞）。至于污染问题，复苏初期影响不大的。
why0393

引用回帖:
2楼: Originally posted by yongliqin at 2012-12-06 10:39:25
你可以尝试一下在96孔板中复苏一下，待细胞长起来后在转回到瓶中，可能你本身活的细胞就不是很多，直接在瓶中复苏的话不容易活。

嗯，正有此意！多谢多谢！
why0393

引用回帖:
3楼: Originally posted by love2412 at 2012-12-06 11:30:01
刚复苏时的活性、密度是多少？要保证活细胞的密度。活性实在太低的话试下梯度离心分离活细胞，或者像2L说的那样用微孔板（还可以加滋养细胞）。至于污染问题，复苏初期影响不大的。

嗯，我担心细胞太脆弱，所以只是在复苏之后用培养液洗两遍，低速离心。其实刚开始里面有活的细胞，只不过在过了一天之后细胞全萎缩了
，
华俊

杂交瘤细胞复苏本来就是没有细胞系后复苏，也做杂交瘤细胞，并且遇到同样的问题，但是经过一段时间的摸索后来将细胞也全部复苏存活。
这个很大程度上是细胞冻存的问题，冻存液、冻存温度等等，很多实验室喜欢将细胞直接放在-80度冰箱中，这个保存时间很有限，一般三个月复苏都存在问题，放在液氮中就好多了，
复苏是注意几个问题：细胞密度，太稀少的话很难活下来，培养中发现，细胞密度越大细胞分裂越快，有文献报道，可能会依赖自身分泌的某些物质生长；合理把握换液时间；最好采用24孔板复苏，注意培养基配方，需要优化配方等等。祝好