破菌液和平衡液中是否含有EDTA？如果有肯定结合不上

正常浓度的Tris 和NaCl到底是多少呢？或许你认为正常 其实不正常
而且你上样的PH值 有可能也是很重要的因素之一

首先，你的盐浓度会不会太高了，结合不上去；其次，你的镍柱多大的，载量对于你的蛋白来说是不是太小了；第三，镍柱使用几次了，是不是柱效不好了，

是不是加的样太多，挂住子时间短，再有咪唑的浓度不可太大

是否可能是你的蛋白构象将his-tag包裹，无法与Ni+结合

1.重配BINDING BUFFER
2.将HIS加到C端

含有EDTA？如果有肯定结合不上
PH值应在6.5-8.0