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【求助/交流】关于酵母菌落PCR

作者 zcqcau: 来源: 小木虫 400 8 举报帖子

不知道大家有没有做酵母表达的，基因是否转进去做PCR鉴定的时候，大家直接菌落PCR还是提取DNA后进行PCR？？

我今天的菌落PCR又没有成功，好郁闷啊！！！！

反应程序：95，10min；（94，1min；55，1min；72，2min）30cycles，72，10min 返回小木虫查看更多

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精华评论

434744419

可以直接做菌落PCR 我做过没什么问题一次就P出来了条件和原来的条件一样啊
gaiyf

做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键，太多或者是太少都不行，这个方法在已经练熟了，有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是真菌，直接菌落pcr的效果肯定不如细菌的好，所以还是建议楼主先提DNA吧
zcqcau

原来的条件是什么意思？？
引用回帖:
Originally posted by 434744419 at 2010-05-17 20:01:45:
可以直接做菌落PCR 我做过没什么问题一次就P出来了条件和原来的条件一样啊
zcqcau

您做菌落PCR的时候的效果怎么样？或者说成功率多大？
引用回帖:
Originally posted by gaiyf at 2010-05-17 20:14:54:
做菌落pcr的时候挑的菌体的多少很关键，太多或者是太少都不行，这个方法在已经练熟了，有经验有感觉以后是很方便很快捷的。但是刚开始做的时候会出现一些问题。当然最保险的方法还是提dna后再pcr。还有就是酵母是 ...

，
gaiyf

我们做菌落pcr时主要是针对细菌的。做真菌的一般还是要提dna的
王雨云

做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧，不一定要提DNA，然后再用处理后的菌体做PCR
zcqcau

怎么处理呢？
引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2010-05-18 20:50:25:
做菌落PCR之前可以先将菌体处理一下吧，不一定要提DNA，然后再用处理后的菌体做PCR