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大肠杆菌的稀释平板计数,老是出不来菌落,求助各位大神

作者 abc213
来源: 小木虫 1050 21 举报帖子
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本人对于细菌培养和计数一窍不通,最近由于课题要求,在做大肠杆菌的培养,采用的是稀释涂布平板,重复了好多次,都是稀释倍数10^-1的上面有菌落,不至于糊板,但到了10^-2和10^-3只有零星的几个,到了10^-4—10^-6一个菌落都没有,如下图。操作步骤完全是按照书上来的,10^-3应该是没涂开,但10^-2的情况是真的搞不懂,请大神们支招,帮帮忙!!!

大肠杆菌的稀释平板计数,老是出不来菌落,求助各位大神
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  • 精华评论
  • liuyi8203

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 08:29:57
    那10^-2是什么原因导致的,您知道吗?应该不是没混匀的问题吧,我稀释振荡时间挺长的...

    涂布的时候,涂布棒没有凉就涂了,太烫了,把菌烫死了

  • 我爱我熊

    引用回帖:
    9楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 10:43:14
    我是先培养一个菌落平板,划线培养24h,之后挑单菌落到5ml的无菌生理盐水里面,振荡均匀,这就是未稀释前的菌悬液,我这样操作可以吗?之后的平板我是放在4℃的冰箱里保存备用,只保存一个星期。还想问下,您是怎么 ...

    一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次性的还是玻璃的。一次性的每个板子都要换一个涂布棒;如果是玻璃的则需要没次烧一下,然后等着冷却好再开始涂布
    2、培养基的问题,一般都是用营养琼脂这一类基础培养基,培养基表面需要保持一定的干燥,不能太湿或者太干。
    3、如果想要做一个比较准确的计数,还是需要配制麦氏比浊管。1%硫酸、1.175%氯化钡   0.5麦氏管:50微升+9950微升
    4、先把菌纯化再开始实验

  • 我爱我熊

    引用回帖:
    13楼: Originally posted by 我爱我熊 at 2017-11-13 11:33:40
    一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次 ...

    50微升氯化钡+9950微升硫酸

  • abc213

    引用回帖:
    13楼: Originally posted by 我爱我熊 at 2017-11-13 11:33:40
    一般大肠杆菌24小时单菌落应该长得很好了,一个单菌落加到5ml盐水的菌悬液会大于0.5麦氏,菌悬液制作应该没有问题。而你涂布的只有第一个稀释梯度看着比较正常。那考虑1、是不是涂布这一个步骤的问题,涂布棒是一次 ...

    1.涂布棒是玻璃的,由于是从高稀释度到低稀释度涂的(10^-6—10^-1),所以也没有更换玻璃棒和灼烧玻璃棒,涂得时候是等涂布棒完全冷却后涂的
    2.培养基之前用的就是普通的营养琼脂培养基,这次换成了胰蛋白胨大豆琼脂培养基,想看看是不是培养基对细菌菌落的影响
    3.其实我主要需要的是稀释到一定程度可计数的菌落(30—300左右),具体菌落是多少个
    4.纯化是不是就是对大肠杆菌不断地平板划线培养,然后挑单菌落继续培养?

  • 我爱我熊

    引用回帖:
    15楼: Originally posted by abc213 at 2017-11-13 12:37:44
    1.涂布棒是玻璃的,由于是从高稀释度到低稀释度涂的(10^-6—10^-1),所以也没有更换玻璃棒和灼烧玻璃棒,涂得时候是等涂布棒完全冷却后涂的
    2.培养基之前用的就是普通的营养琼脂培养基,这次换成了胰蛋白胨大豆 ...

    TSA其实和营养琼脂差别不大,可以试试。
    30-300应该在-4次方这个稀释度左右,具体看板子结果
    纯化就是划线分离出单菌落,镜检格兰染色,方便的话简单鉴定一下(IMVC)。靛基质阳性,甲基红阳性,VP阴性,柠檬酸盐阴性

    额。。。其实,你应该重复一下你的实验,说不定就结果就正常了,也许就不用分析这么多原因了

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